人热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达及鉴定
인열휴극단백70재필적효모중적표체급감정
Expression and identification of recombinant human heat shock protein70 in pichia pastoris
  • 万方数据
    中国老年学杂志 중국노년학잡지
    CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
    2005年 5期 516-518 ,共3页

    马杰%焦平%宿晓云%贺巾超%杨莉莉%王建秋%耿学军%范伟全%魏传宇%张英%罗琳%孔宁%颜炜群

    마걸%초평%숙효운%하건초%양리리%왕건추%경학군%범위전%위전우%장영%라림%공저%안위군

    重组人热休克蛋白70(rhHSP70)%基因表达%毕赤酵母 重組人熱休剋蛋白70(rhHSP70)%基因錶達%畢赤酵母
    중조인열휴극단백70(rhHSP70)%기인표체%필적효모
    目的在毕赤酵母(pichia pastoris)中高效表达人热休克蛋白70(hHSP70),制备具有天然与hHSP70相同结构和活性的重组hHSP70(rhHSP70).方法用PCR法自人DNA文库中克隆hHSP70的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP70.经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33.用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆, Western blot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP70,筛选高表达工程菌.结果经PCR法克隆的hHSP70 DNA序列与Gene Bank登录的cDNA序列一致.将hHSP70 DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP70真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的转染阳性克隆.SDS-PAGE和Western blot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP70,分子量72 kD.氨基酸序列分析证实rhHSP70氨基端15个氨基酸与天然rhHSP70完全一致.rhHSP70表达量高达250mg·L-1.结论获得高效表达rhHSP70的毕赤酵母工程菌.
    목적재필적효모(pichia pastoris)중고효표체인열휴극단백70(hHSP70),제비구유천연여hHSP70상동결구화활성적중조hHSP70(rhHSP70).방법용PCR법자인DNA문고중극륭hHSP70적DNA,구건진핵표체재체pPICZα/hHSP70.경핵산측서학증후,전전화필적효모균주X-33.용PCR법사선Zeocin항성적전염양성극륭, Western blot법감정갑순유도적배양상청액중적rhHSP70,사선고표체공정균.결과경PCR법극륭적hHSP70 DNA서렬여Gene Bank등록적cDNA서렬일치.장hHSP70 DNA정향삽입pPICZα,구건pPICZα/hHSP70진핵표체재체병경전전화획득Zeocin항성적전염양성극륭.SDS-PAGE화Western blot분석현시료갑순유도적배양기상청중함유rhHSP70,분자량72 kD.안기산서렬분석증실rhHSP70안기단15개안기산여천연rhHSP70완전일치.rhHSP70표체량고체250mg·L-1.결론획득고효표체rhHSP70적필적효모공정균.
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