CAJ | 학술논문

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对培养的乳鼠心肌细胞内受磷蛋白(PLB)和肌浆网钙泵蛋白同功酶(SERCA2a)基因表达及细胞内游离钙离子浓度的影响.方法体外培养的乳鼠心肌细胞被随机分成对照组和不同浓度TNFα(1、10、30、50、70μg/L)干预组,用单管一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术,观察TNFα对乳鼠心肌细胞PLB和SERCA2a基因表达的影响.采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定TNFα对单个乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度的影响.结果TNFα浓度依赖性增高PLB mRNA和蛋白质的表达,10、30、50、70μg/L TNFα组PLB mRNA表达量分别较对照组增加66%、106%、141%、189%(P＜0.05),蛋白质的表达分别较对照组提高30%、48%、73%、114%(P＜0.001).而1μg/L TNFα组与对照组PLB mRNA和蛋白质表达差异均无显著性.TNFα不影响SERCA2a的表达.50μg/L TNFα作用细胞24 h,能降低异丙肾上腺素刺激的[Ca2+]i变化幅度的增高,[Ca2+]i变化幅度较对照组减少33%(P＜0.01),但对静息状态下[Ca2+]i变化幅度无影响.结论TNFα可增强心肌细胞内PLB的表达,降低心肌细胞内[Ca2+]i的变化,这可能与TNFα对心肌细胞的负性肌力作用有关.
목적탐토종류배사인자α(TNFα)대배양적유서심기세포내수린단백(PLB)화기장망개빙단백동공매(SERCA2a)기인표체급세포내유리개리자농도적영향.방법체외배양적유서심기세포피수궤분성대조조화불동농도TNFα(1、10、30、50、70μg/L)간예조,용단관일보법역전록취합매련반응(RT-PCR)화Western blotting기술,관찰TNFα대유서심기세포PLB화SERCA2a기인표체적영향.채용Fluo-3/Am형광염색제부재세포,재격광공취초현미경하측정TNFα대단개유서심기세포내유리개리자농도적영향.결과TNFα농도의뢰성증고PLB mRNA화단백질적표체,10、30、50、70μg/L TNFα조PLB mRNA표체량분별교대조조증가66%、106%、141%、189%(P＜0.05),단백질적표체분별교대조조제고30%、48%、73%、114%(P＜0.001).이1μg/L TNFα조여대조조PLB mRNA화단백질표체차이균무현저성.TNFα불영향SERCA2a적표체.50μg/L TNFα작용세포24 h,능강저이병신상선소자격적[Ca2+]i변화폭도적증고,[Ca2+]i변화폭도교대조조감소33%(P＜0.01),단대정식상태하[Ca2+]i변화폭도무영향.결론TNFα가증강심기세포내PLB적표체,강저심기세포내[Ca2+]i적변화,저가능여TNFα대심기세포적부성기력작용유관.