上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2006年
2期
155-158
,共4页
柴蔚然%杨涛%胡晓年%牛勃
柴蔚然%楊濤%鬍曉年%牛勃
시위연%양도%호효년%우발
肿瘤坏死因子-α%单链抗体%噬菌体展示技术
腫瘤壞死因子-α%單鏈抗體%噬菌體展示技術
종류배사인자-α%단련항체%서균체전시기술
目的 应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库.方法 利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库.由Linker-primer mix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体.再用RS primer mix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因.以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库.结果 成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库.经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011 pfu.结论 rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础.
目的 應用噬菌體展示技術構建抗重組人腫瘤壞死因子-α(rhTNF-α)的單鏈抗體庫.方法 利用噬菌體錶麵展示技術、繞過雜交瘤技術,提取經免疫BALB/c小鼠淋巴細胞總RNA,用相應引物擴增小鼠免疫毬蛋白VH基因和VL基因,構建VH、VL抗體庫.由Linker-primer mix經重疊延伸反應將重鏈可變區基因與輕鏈可變區基因拼接成單鏈抗體.再用RS primer mix以單鏈抗體為模闆進行第二次聚閤酶鏈反應,從而穫得全套抗rhTNF-α的單鏈抗體基因.以SfiⅠ/NotⅠ,位點定嚮插入pCANTAB-5E噬菌粒載體,轉化大腸桿菌TG1後,經M13KO7輔助噬菌體拯救,構建成全套抗rhTNF-α單鏈抗體錶麵展示文庫.結果 成功構建瞭rhTNF-α全套單鏈抗體噬菌體錶麵展示文庫.經M13KO7超感染後,噬斑計數滴度為2.1×1011 pfu.結論 rhTNF-α全套單鏈抗體噬菌體錶麵展示文庫的構建,為研究rhTNF-α抗體結閤位點,瞭解其結構與功能的關繫以及研究用于臨床免疫治療的新型抗體打下瞭基礎.
목적 응용서균체전시기술구건항중조인종류배사인자-α(rhTNF-α)적단련항체고.방법 이용서균체표면전시기술、요과잡교류기술,제취경면역BALB/c소서림파세포총RNA,용상응인물확증소서면역구단백VH기인화VL기인,구건VH、VL항체고.유Linker-primer mix경중첩연신반응장중련가변구기인여경련가변구기인병접성단련항체.재용RS primer mix이단련항체위모판진행제이차취합매련반응,종이획득전투항rhTNF-α적단련항체기인.이SfiⅠ/NotⅠ,위점정향삽입pCANTAB-5E서균립재체,전화대장간균TG1후,경M13KO7보조서균체증구,구건성전투항rhTNF-α단련항체표면전시문고.결과 성공구건료rhTNF-α전투단련항체서균체표면전시문고.경M13KO7초감염후,서반계수적도위2.1×1011 pfu.결론 rhTNF-α전투단련항체서균체표면전시문고적구건,위연구rhTNF-α항체결합위점,료해기결구여공능적관계이급연구용우림상면역치료적신형항체타하료기출.
