CAJ | 학술논문

目的探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4在心肌细胞分化中的作用.方法用核糖酶技术获得尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4低表达小鼠胚胎干细胞克隆,将小鼠胚胎干细胞分化为胚小体.应用荧光染料2,7二氯氢化荧光素二酯和定量氮蓝四唑试验检测活性氧水平;逆转录聚合酶链反应和Western blot测定尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶mRNA水平和心室肌肌球蛋白轻链2蛋白表达水平;DNA laddering检测细胞凋亡;原位杂交分析尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4在胚胎心脏中的表达.结果活性氧清除剂N乙酰基半胱氨酸、过氧化氢酶和尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶抑制剂二甲苯基碘可抑制胚胎干细胞分化成心肌细胞,而较低浓度(1 nmol/L～100 nmol/L)的过氧化氢可明显促进心肌细胞分化,但较高浓度(1 μmol/L)的过氧化氢显示出抑制作用(P＜0.001).实验发现,心肌细胞分化过程中内源性活性氧的产生主要来自尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4.应用核糖酶技术抑制胚胎干细胞中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4的表达,可引起活性氧水平下降(P＜0.001),肌球蛋白轻链2含量显著降低,使心肌细胞的分化受到明显的抑制(P＜0.001).尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4的高水平表达使干细胞产生大量活性氧,也显著抑制心肌细胞的分化(P＜0.05).结论尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4通过产生活性氧在心肌细胞分化中起关键作用.
목적 탐토니극선알선표령이핵감산린산양화매4재심기세포분화중적작용.방법 용핵당매기술획득니극선알선표령이핵감산린산양화매4저표체소서배태간세포극륭,장소서배태간세포분화위배소체.응용형광염료2,7이록경화형광소이지화정량담람사서시험검측활성양수평;역전록취합매련반응화Western blot측정니극선알선표령이핵감산린산양화매mRNA수평화심실기기구단백경련2단백표체수평;DNA laddering검측세포조망;원위잡교분석니극선알선표령이핵감산린산양화매4재배태심장중적표체.결과 활성양청제제N을선기반광안산、과양화경매화니극선알선표령이핵감산린산양화매억제제이갑분기전가억제배태간세포분화성심기세포,이교저농도(1 nmol/L～100 nmol/L)적과양화경가명현촉진심기세포분화,단교고농도(1 μmol/L)적과양화경현시출억제작용(P＜0.001).실험발현,심기세포분화과정중내원성활성양적산생주요래자니극선알선표령이핵감산린산양화매4.응용핵당매기술억제배태간세포중니극선알선표령이핵감산린산양화매4적표체,가인기활성양수평하강(P＜0.001),기구단백경련2함량현저강저,사심기세포적분화수도명현적억제(P＜0.001).니극선알선표령이핵감산린산양화매4적고수평표체사간세포산생대량활성양,야현저억제심기세포적분화(P＜0.05).결론 니극선알선표령이핵감산린산양화매4통과산생활성양재심기세포분화중기관건작용.