CAJ | 학술논문

目的:构建及鉴定胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgG Fc嵌合蛋白的真核表达载体pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc.方法:实验于2004-09/2005-07在南京医科大学病原生物学系完成.①采用反转录-聚合酶链反应方法从ICR小鼠的脑组织和脾脏中分别扩增胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgG Fc段(mIgG Fc),并引入相应的酶切位点(XhoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoR Ⅰ).②分别将扩增后的片段克隆入pUCm-T质粒,通过XhoⅠ/BamHⅠ双酶切和连接后,获得pUCm-T/mIA-2i-mIgG Fc重组质粒.③经过Xho Ⅰ/EcRⅠ双酶切后,将融合基因mIA-2i-mlgG Fc克隆入真核表达载体pEGFP-N2.通过酶切、聚合酶链反应及插入片段序列测定对重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc进行鉴定.结果:①从ICR鼠的脑组织和脾脏中反转录-聚合酶链反应获得胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区和IgG Fc段.②通过基因工程操作,获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i和pUCm-T/mIgG Fc,并经酶切鉴定克隆成功.③获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i-mIgG Fc,经聚合酶链反应和双位点酶切鉴定重组成功.④获得重组质粒pFGFP-N2/mIA-2j-mIgG F(和pEGFP-N2/mIA-2j,经聚合酶链反应、酶切及测序鉴定证实特异性片断插入真核表达载体成功.结论:pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc真核表达载体的构建,为利用胰岛细胞瘤相关蛋白2基因疫苗预防非肥胖性糖尿病小鼠发生自身免疫性糖尿病的研究奠定了基础.
목적:구건급감정이도세포류상관단백2포내구(mIA-2i)화IgG Fc감합단백적진핵표체재체pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc.방법:실험우2004-09/2005-07재남경의과대학병원생물학계완성.①채용반전록-취합매련반응방법종ICR소서적뇌조직화비장중분별확증이도세포류상관단백2포내구(mIA-2i)화IgG Fc단(mIgG Fc),병인입상응적매절위점(XhoⅠ/BamHⅠ화BamHⅠ/EcoR Ⅰ).②분별장확증후적편단극륭입pUCm-T질립,통과XhoⅠ/BamHⅠ쌍매절화련접후,획득pUCm-T/mIA-2i-mIgG Fc중조질립.③경과Xho Ⅰ/EcRⅠ쌍매절후,장융합기인mIA-2i-mlgG Fc극륭입진핵표체재체pEGFP-N2.통과매절、취합매련반응급삽입편단서렬측정대중조질립pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc진행감정.결과:①종ICR서적뇌조직화비장중반전록-취합매련반응획득이도세포류상관단백2포내구화IgG Fc단.②통과기인공정조작,획득중조극륭질립pUCm-T/mIA-2i화pUCm-T/mIgG Fc,병경매절감정극륭성공.③획득중조극륭질립pUCm-T/mIA-2i-mIgG Fc,경취합매련반응화쌍위점매절감정중조성공.④획득중조질립pFGFP-N2/mIA-2j-mIgG F(화pEGFP-N2/mIA-2j,경취합매련반응、매절급측서감정증실특이성편단삽입진핵표체재체성공.결론:pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc진핵표체재체적구건,위이용이도세포류상관단백2기인역묘예방비비반성당뇨병소서발생자신면역성당뇨병적연구전정료기출.