第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2008年
12期
1071-1074
,共4页
王馥丽%陈苏民%陈南春%赵玮钦
王馥麗%陳囌民%陳南春%趙瑋欽
왕복려%진소민%진남춘%조위흠
重组人骨形成蛋白2成熟肽%蛋白质/分离和提纯%蛋白质复性
重組人骨形成蛋白2成熟肽%蛋白質/分離和提純%蛋白質複性
중조인골형성단백2성숙태%단백질/분리화제순%단백질복성
目的:优化高浓度的人骨形成蛋白2成熟肽(rh-BMP-2m)的复性条件.方法: 将工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,裂菌收集包涵体后经离子交换色谱分离纯化.纯化后的蛋白在不同的温度、复性液pH,氧化交换系统浓度、盐浓度等条件下进行透析复性.透析复性后进行非还原的SDS-PAGE,检测rhBMP-2m活性形式二聚体的含量,同时找出相对较优的复性方法对复性产物进行0.22 μm微孔滤膜除菌并计算其损失率.结果: 经透析复性后rhBMP-2m完全可溶,而且其活性形式二聚体的含量达到30%左右,即复性后二聚体的rhBMP-2m可以达到每升发酵液800 mg,并且经微孔滤膜除菌后rhBMP-2m活性形式二聚体的含量基本没有损失,同时蛋白定量也表明过滤除菌后蛋白损失不超过10%.结论: 高pH有利于rhBMP-2m的复性,除变性剂尿素时采用低pH可以保持高浓度rhBMP-2m复性后仍保持可溶.蛋白质的浓度、pH和温度对蛋白复性的结果影响很大,但盐浓度、氧化交换系统的浓度和透析外液体积对蛋白复性影响不是很大.
目的:優化高濃度的人骨形成蛋白2成熟肽(rh-BMP-2m)的複性條件.方法: 將工程菌株進行高密度髮酵、溫度誘導錶達,裂菌收集包涵體後經離子交換色譜分離純化.純化後的蛋白在不同的溫度、複性液pH,氧化交換繫統濃度、鹽濃度等條件下進行透析複性.透析複性後進行非還原的SDS-PAGE,檢測rhBMP-2m活性形式二聚體的含量,同時找齣相對較優的複性方法對複性產物進行0.22 μm微孔濾膜除菌併計算其損失率.結果: 經透析複性後rhBMP-2m完全可溶,而且其活性形式二聚體的含量達到30%左右,即複性後二聚體的rhBMP-2m可以達到每升髮酵液800 mg,併且經微孔濾膜除菌後rhBMP-2m活性形式二聚體的含量基本沒有損失,同時蛋白定量也錶明過濾除菌後蛋白損失不超過10%.結論: 高pH有利于rhBMP-2m的複性,除變性劑尿素時採用低pH可以保持高濃度rhBMP-2m複性後仍保持可溶.蛋白質的濃度、pH和溫度對蛋白複性的結果影響很大,但鹽濃度、氧化交換繫統的濃度和透析外液體積對蛋白複性影響不是很大.
목적:우화고농도적인골형성단백2성숙태(rh-BMP-2m)적복성조건.방법: 장공정균주진행고밀도발효、온도유도표체,렬균수집포함체후경리자교환색보분리순화.순화후적단백재불동적온도、복성액pH,양화교환계통농도、염농도등조건하진행투석복성.투석복성후진행비환원적SDS-PAGE,검측rhBMP-2m활성형식이취체적함량,동시조출상대교우적복성방법대복성산물진행0.22 μm미공려막제균병계산기손실솔.결과: 경투석복성후rhBMP-2m완전가용,이차기활성형식이취체적함량체도30%좌우,즉복성후이취체적rhBMP-2m가이체도매승발효액800 mg,병차경미공려막제균후rhBMP-2m활성형식이취체적함량기본몰유손실,동시단백정량야표명과려제균후단백손실불초과10%.결론: 고pH유리우rhBMP-2m적복성,제변성제뇨소시채용저pH가이보지고농도rhBMP-2m복성후잉보지가용.단백질적농도、pH화온도대단백복성적결과영향흔대,단염농도、양화교환계통적농도화투석외액체적대단백복성영향불시흔대.
