安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2008年
5期
493-496
,共4页
高玉录%马筱玲%沈继龙%戴媛媛%付广林%张义永%鲁怀伟%李华
高玉錄%馬篠玲%瀋繼龍%戴媛媛%付廣林%張義永%魯懷偉%李華
고옥록%마소령%침계룡%대원원%부엄림%장의영%로부위%리화
杀白细胞素类/遗传学%基因表达%克隆,分子
殺白細胞素類/遺傳學%基因錶達%剋隆,分子
살백세포소류/유전학%기인표체%극륭,분자
目的 构建Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL) lukS-PV基因表达载体,并在大肠杆菌中表达相应蛋白.方法 提取PVL阳性金黄色葡萄球菌的基因,PCR方法扩增lukS-PV,A-T克隆至pGEM-T载体上,经PCR、双酶切和测序鉴定后,亚克隆到pET28a(+)表达载体上,鉴定并转化至Rosetta(DE3)plys表达宿主菌中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定.结果 构建了lukS-PV-pGEM-T和lukS-PV-pET28a(+)重组质粒,经PCR扩增和限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切均得到939bp的目的 片段,基因测序与GENEBANK中的PVL的序列一致,宿主菌表达带HIS标签的重组LukS-PV蛋白.结论 成功克隆lukS-PV基因和构建重组表达质粒,并在宿主菌中成功表达重组LukS-PV蛋白,为PVL免疫学检测方法的建立奠定基础.
目的 構建Panton-Valentine殺白細胞毒素(PVL) lukS-PV基因錶達載體,併在大腸桿菌中錶達相應蛋白.方法 提取PVL暘性金黃色葡萄毬菌的基因,PCR方法擴增lukS-PV,A-T剋隆至pGEM-T載體上,經PCR、雙酶切和測序鑒定後,亞剋隆到pET28a(+)錶達載體上,鑒定併轉化至Rosetta(DE3)plys錶達宿主菌中,用IPTG誘導錶達,併用SDS-PAGE電泳分析和Western blot鑒定.結果 構建瞭lukS-PV-pGEM-T和lukS-PV-pET28a(+)重組質粒,經PCR擴增和限製性內切酶BamHI和XhoI雙酶切均得到939bp的目的 片段,基因測序與GENEBANK中的PVL的序列一緻,宿主菌錶達帶HIS標籤的重組LukS-PV蛋白.結論 成功剋隆lukS-PV基因和構建重組錶達質粒,併在宿主菌中成功錶達重組LukS-PV蛋白,為PVL免疫學檢測方法的建立奠定基礎.
목적 구건Panton-Valentine살백세포독소(PVL) lukS-PV기인표체재체,병재대장간균중표체상응단백.방법 제취PVL양성금황색포도구균적기인,PCR방법확증lukS-PV,A-T극륭지pGEM-T재체상,경PCR、쌍매절화측서감정후,아극륭도pET28a(+)표체재체상,감정병전화지Rosetta(DE3)plys표체숙주균중,용IPTG유도표체,병용SDS-PAGE전영분석화Western blot감정.결과 구건료lukS-PV-pGEM-T화lukS-PV-pET28a(+)중조질립,경PCR확증화한제성내절매BamHI화XhoI쌍매절균득도939bp적목적 편단,기인측서여GENEBANK중적PVL적서렬일치,숙주균표체대HIS표첨적중조LukS-PV단백.결론 성공극륭lukS-PV기인화구건중조표체질립,병재숙주균중성공표체중조LukS-PV단백,위PVL면역학검측방법적건립전정기출.
