医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2010年
2期
117-122
,共6页
许波群%李瑛%薛凯%李梅%马翔%刁飞扬%崔毓桂%刘嘉茵
許波群%李瑛%薛凱%李梅%馬翔%刁飛颺%崔毓桂%劉嘉茵
허파군%리영%설개%리매%마상%조비양%최육계%류가인
SET基因%RNA干扰%重组腺病毒载体
SET基因%RNA榦擾%重組腺病毒載體
SET기인%RNA간우%중조선병독재체
目的 SET基因表达产物是SET/TAF-1β蛋白,功能涉及基因表达调控、染色质修饰、翻译后修饰等生物过程,多水平、多通路地调节靶因子,其表达异常与多种疾病相关.为研究SET基因与临床多种疾病发生发展的关系,文中构建表达人SET基因的小分子干扰RNA (siRNA)重组腺病毒载体. 方法 根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸.pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA. 该穿梭质粒经NotⅠ和HindⅢ双酶切后与 pAdTrack-CMV 连接,构建含有绿色荧光蛋白(green fluorescense protein,GFP)报告基因的穿梭质粒PATC-H1-siRNA.分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒PATC-H1-siRNA 转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组.PacⅠ酶切线性化重组质粒pAd-H1-siRNA后,转染AD293细胞进行病毒包装和扩增.根据GFP报告基因的表达观察重组病毒的产生和感染效率,用Western blot检测人SET蛋白的表达水平. 结果 穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功;重组腺病毒载体经AD293细胞包装后可观察到GFP表达;获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞.经Western blot检测,SET基因腺病毒载体(AdH1-SiRNA/SET)感染组与未感染腺病毒载体组(空白对照)和感染对照腺病毒载体组(AdH1-SiRNA/NS)相比,SET蛋白表达水平显著降低(P<0.05),抑制效率为50%～70%. 结论 成功构建了表达人SET基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA/SET,并在AD293细胞中验证其抑制SET蛋白表达的作用,为进一步研究SET基因参与多种疾病的发生发展提供了材料.
目的 SET基因錶達產物是SET/TAF-1β蛋白,功能涉及基因錶達調控、染色質脩飾、翻譯後脩飾等生物過程,多水平、多通路地調節靶因子,其錶達異常與多種疾病相關.為研究SET基因與臨床多種疾病髮生髮展的關繫,文中構建錶達人SET基因的小分子榦擾RNA (siRNA)重組腺病毒載體. 方法 根據siRNA靶序列設計併閤成2條互補的64 bp寡覈苷痠.pShuttle-H1穿梭質粒經BglⅡ、HindⅢ雙酶切後,與退火的寡覈苷痠連接,構建穿梭質粒pShuttle-H1-siRNA. 該穿梭質粒經NotⅠ和HindⅢ雙酶切後與 pAdTrack-CMV 連接,構建含有綠色熒光蛋白(green fluorescense protein,GFP)報告基因的穿梭質粒PATC-H1-siRNA.分彆將腺病毒骨架質粒pAdEasy-1和穿梭質粒PATC-H1-siRNA 轉化至BJ-5183感受態細菌中進行同源重組.PacⅠ酶切線性化重組質粒pAd-H1-siRNA後,轉染AD293細胞進行病毒包裝和擴增.根據GFP報告基因的錶達觀察重組病毒的產生和感染效率,用Western blot檢測人SET蛋白的錶達水平. 結果 穿梭質粒pShuttle-H1-siRNA經雙酶切和測序證實構建成功;重組腺病毒載體經AD293細胞包裝後可觀察到GFP錶達;穫得的重組腺病毒載體感染AD293細胞.經Western blot檢測,SET基因腺病毒載體(AdH1-SiRNA/SET)感染組與未感染腺病毒載體組(空白對照)和感染對照腺病毒載體組(AdH1-SiRNA/NS)相比,SET蛋白錶達水平顯著降低(P<0.05),抑製效率為50%～70%. 結論 成功構建瞭錶達人SET基因的siRNA重組腺病毒載體AdH1-siRNA/SET,併在AD293細胞中驗證其抑製SET蛋白錶達的作用,為進一步研究SET基因參與多種疾病的髮生髮展提供瞭材料.
목적 SET기인표체산물시SET/TAF-1β단백,공능섭급기인표체조공、염색질수식、번역후수식등생물과정,다수평、다통로지조절파인자,기표체이상여다충질병상관.위연구SET기인여림상다충질병발생발전적관계,문중구건표체인SET기인적소분자간우RNA (siRNA)중조선병독재체. 방법 근거siRNA파서렬설계병합성2조호보적64 bp과핵감산.pShuttle-H1천사질립경BglⅡ、HindⅢ쌍매절후,여퇴화적과핵감산련접,구건천사질립pShuttle-H1-siRNA. 해천사질립경NotⅠ화HindⅢ쌍매절후여 pAdTrack-CMV 련접,구건함유록색형광단백(green fluorescense protein,GFP)보고기인적천사질립PATC-H1-siRNA.분별장선병독골가질립pAdEasy-1화천사질립PATC-H1-siRNA 전화지BJ-5183감수태세균중진행동원중조.PacⅠ매절선성화중조질립pAd-H1-siRNA후,전염AD293세포진행병독포장화확증.근거GFP보고기인적표체관찰중조병독적산생화감염효솔,용Western blot검측인SET단백적표체수평. 결과 천사질립pShuttle-H1-siRNA경쌍매절화측서증실구건성공;중조선병독재체경AD293세포포장후가관찰도GFP표체;획득적중조선병독재체감염AD293세포.경Western blot검측,SET기인선병독재체(AdH1-SiRNA/SET)감염조여미감염선병독재체조(공백대조)화감염대조선병독재체조(AdH1-SiRNA/NS)상비,SET단백표체수평현저강저(P<0.05),억제효솔위50%～70%. 결론 성공구건료표체인SET기인적siRNA중조선병독재체AdH1-siRNA/SET,병재AD293세포중험증기억제SET단백표체적작용,위진일보연구SET기인삼여다충질병적발생발전제공료재료.
