生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
3期
401-405
,共5页
曹峰子%伍诚意%宋勤叶%江洪%梁之昶%季海峰%陈小玲
曹峰子%伍誠意%宋勤葉%江洪%樑之昶%季海峰%陳小玲
조봉자%오성의%송근협%강홍%량지창%계해봉%진소령
反向斑点杂交%rRNA基因%猪致病基因%反向PCR
反嚮斑點雜交%rRNA基因%豬緻病基因%反嚮PCR
반향반점잡교%rRNA기인%저치병기인%반향PCR
目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法.方法:将23S rRNA基因芯片用的针对12种细菌的25～30 mer探针加长到30～38 mer,2对通用引物序列不变.用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交.结果:修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100 fg DNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因.结论:建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力.
目的:建立檢測豬常見緻病菌的反嚮斑點雜交方法.方法:將23S rRNA基因芯片用的針對12種細菌的25～30 mer探針加長到30～38 mer,2對通用引物序列不變.用地高辛標記下遊引物,以尼龍膜為載體製備膜芯片,檢驗探針/膜雜交的特異性和敏感性;另外設計1條大腸桿菌K88基因探針、一段帶K88探針的報告基因和1對報告基因的反嚮PCR引物,在PCR體繫中增加封口的K88報告基因和反嚮引物對,被檢樣品擴增後進行膜雜交.結果:脩改的13條探針與參攷目標菌株在膜上成特異性雜交,對52箇參攷菌株和野外分離株的檢測準確率為92%;膜雜交的敏感性與玻片芯片接近,最小檢齣量為100 fg DNA;在尼龍膜上增加K88探針,與3重PCR產物雜交,可以檢測到大腸桿菌K88毒力基因.結論:建立的反嚮斑點雜交方法簡便快速,檢測成本低,可用于儀器設備不足的實驗室,同時可以加入檢測如大腸桿菌K88等緻病基因,提高基于保守基因的芯片的診斷能力.
목적:건립검측저상견치병균적반향반점잡교방법.방법:장23S rRNA기인심편용적침대12충세균적25～30 mer탐침가장도30～38 mer,2대통용인물서렬불변.용지고신표기하유인물,이니룡막위재체제비막심편,검험탐침/막잡교적특이성화민감성;령외설계1조대장간균K88기인탐침、일단대K88탐침적보고기인화1대보고기인적반향PCR인물,재PCR체계중증가봉구적K88보고기인화반향인물대,피검양품확증후진행막잡교.결과:수개적13조탐침여삼고목표균주재막상성특이성잡교,대52개삼고균주화야외분리주적검측준학솔위92%;막잡교적민감성여파편심편접근,최소검출량위100 fg DNA;재니룡막상증가K88탐침,여3중PCR산물잡교,가이검측도대장간균K88독력기인.결론:건립적반향반점잡교방법간편쾌속,검측성본저,가용우의기설비불족적실험실,동시가이가입검측여대장간균K88등치병기인,제고기우보수기인적심편적진단능력.
