中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2010年
4期
35-38
,共4页
呼延蓉%郭伟伟%李明义%黄保续
呼延蓉%郭偉偉%李明義%黃保續
호연용%곽위위%리명의%황보속
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)%核蛋白基因%克隆%可溶性表达
鷄傳染性支氣管炎病毒(IBV)%覈蛋白基因%剋隆%可溶性錶達
계전염성지기관염병독(IBV)%핵단백기인%극륭%가용성표체
核衣壳蛋白(N)是鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的重要结构蛋白.根据GenBank报道的IBV的M41株的N基因序列设计一对引物,从提取的M41株的RNA中利用RT-PCR技术扩增荻得了约1.23kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD18-T,经测定核苷酸序列证实N基因扩增正确,表明已成功构建pMD18-T-N.再将pMD18-T-N用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,将酶切后的N基因片段克隆到表达载体pET-32a,转化入大肠杆菌Rossetta中,用IPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳,电泳结果显示外源基因获得了表达且为可溶性蛋白,Western-blotting检测表明N蛋白可与相应IBV病毒抗体发生特异性的反应,表明N蛋白有一定的生物活性,可为用于生产检测IB的诊断试剂和研制新型IB重组亚单位疫苗奠定基础.
覈衣殼蛋白(N)是鷄傳染性支氣管炎病毒(IBV)的重要結構蛋白.根據GenBank報道的IBV的M41株的N基因序列設計一對引物,從提取的M41株的RNA中利用RT-PCR技術擴增荻得瞭約1.23kb的片段,將該片段插入剋隆載體pMD18-T,經測定覈苷痠序列證實N基因擴增正確,錶明已成功構建pMD18-T-N.再將pMD18-T-N用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切,將酶切後的N基因片段剋隆到錶達載體pET-32a,轉化入大腸桿菌Rossetta中,用IPTG誘導,進行SDS-PAGE電泳,電泳結果顯示外源基因穫得瞭錶達且為可溶性蛋白,Western-blotting檢測錶明N蛋白可與相應IBV病毒抗體髮生特異性的反應,錶明N蛋白有一定的生物活性,可為用于生產檢測IB的診斷試劑和研製新型IB重組亞單位疫苗奠定基礎.
핵의각단백(N)시계전염성지기관염병독(IBV)적중요결구단백.근거GenBank보도적IBV적M41주적N기인서렬설계일대인물,종제취적M41주적RNA중이용RT-PCR기술확증적득료약1.23kb적편단,장해편단삽입극륭재체pMD18-T,경측정핵감산서렬증실N기인확증정학,표명이성공구건pMD18-T-N.재장pMD18-T-N용BamH Ⅰ화Hind Ⅲ쌍매절,장매절후적N기인편단극륭도표체재체pET-32a,전화입대장간균Rossetta중,용IPTG유도,진행SDS-PAGE전영,전영결과현시외원기인획득료표체차위가용성단백,Western-blotting검측표명N단백가여상응IBV병독항체발생특이성적반응,표명N단백유일정적생물활성,가위용우생산검측IB적진단시제화연제신형IB중조아단위역묘전정기출.
