现代农业科技
現代農業科技
현대농업과기
XIANDAIHUA NONGYE
2011年
8期
23-24,28
,共3页
贺爱兰%彭东海%吴小玲%廖艳阳
賀愛蘭%彭東海%吳小玲%廖豔暘
하애란%팽동해%오소령%료염양
UFC1基因%克隆%真核表达载体
UFC1基因%剋隆%真覈錶達載體
UFC1기인%극륭%진핵표체재체
利用pEGFP-C3作为载体,构建与绿色荧光蛋白基因相连的泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)序列的真核表达质粒,观察其在真核细胞中的表达和定位,为进一步研究UFC1基因功能打下了基础.采用RT-PCR方法从宫颈癌Hela细胞中扩增UFC1基因全长cDNA,双酶切后克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,构建并鉴定pEGFP-C3-UFC1质粒.经脂质体介导转染Hela细胞后,在荧光显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况.双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pEGFP-C3-UFC1重组载体.重组载体转染Hela细胞,观察到绿色荧光蛋白表达,还可见绿色荧光呈点状分布于细胞质中;而对照pEGFP-C3质粒转染Hela细胞,绿色荧光蛋白则呈弥散状分布.成功克隆了UFC1基因,构建了pEGFP-C3-UFC1重组质粒.
利用pEGFP-C3作為載體,構建與綠色熒光蛋白基因相連的汎素結閤酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)序列的真覈錶達質粒,觀察其在真覈細胞中的錶達和定位,為進一步研究UFC1基因功能打下瞭基礎.採用RT-PCR方法從宮頸癌Hela細胞中擴增UFC1基因全長cDNA,雙酶切後剋隆到真覈錶達載體pEGFP-C3中,構建併鑒定pEGFP-C3-UFC1質粒.經脂質體介導轉染Hela細胞後,在熒光顯微鏡下觀察目的蛋白在真覈細胞內的錶達情況.雙酶切鑒定和測序分析均證實,已成功構建pEGFP-C3-UFC1重組載體.重組載體轉染Hela細胞,觀察到綠色熒光蛋白錶達,還可見綠色熒光呈點狀分佈于細胞質中;而對照pEGFP-C3質粒轉染Hela細胞,綠色熒光蛋白則呈瀰散狀分佈.成功剋隆瞭UFC1基因,構建瞭pEGFP-C3-UFC1重組質粒.
이용pEGFP-C3작위재체,구건여록색형광단백기인상련적범소결합매UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)서렬적진핵표체질립,관찰기재진핵세포중적표체화정위,위진일보연구UFC1기인공능타하료기출.채용RT-PCR방법종궁경암Hela세포중확증UFC1기인전장cDNA,쌍매절후극륭도진핵표체재체pEGFP-C3중,구건병감정pEGFP-C3-UFC1질립.경지질체개도전염Hela세포후,재형광현미경하관찰목적단백재진핵세포내적표체정황.쌍매절감정화측서분석균증실,이성공구건pEGFP-C3-UFC1중조재체.중조재체전염Hela세포,관찰도록색형광단백표체,환가견록색형광정점상분포우세포질중;이대조pEGFP-C3질립전염Hela세포,록색형광단백칙정미산상분포.성공극륭료UFC1기인,구건료pEGFP-C3-UFC1중조질립.
