中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
5期
378-382
,共5页
王大伟%乔军%张辉%胡圣伟%丁波%陈创夫
王大偉%喬軍%張輝%鬍聖偉%丁波%陳創伕
왕대위%교군%장휘%호골위%정파%진창부
猪白细胞介素2%真核表达%实时定量PCR%淋巴细胞增殖试验
豬白細胞介素2%真覈錶達%實時定量PCR%淋巴細胞增殖試驗
저백세포개소2%진핵표체%실시정량PCR%림파세포증식시험
为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞.经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系.采用实时定量PCR及ELISA测定PoIL-2在BHK-21细胞内的表达,同时以淋巴细胞增殖试验(MTT)检测PoIL-2蛋白活性.试验结果表明稳定整合PoIL-2基因的BHK-21细胞系其PoIL-2 mRNA的转录效率是阴性对照组1.43倍,蛋白表达量是阴性对照组1.29倍.MTT试验表明真核表达的PoIL-2促淋巴细胞增殖活性与阴性对照组相比差异极显著(p＜0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIL-2具有良好的生物学活性.本研究为开发新型基因工程疫苗佐剂和抗病毒制剂奠定了基础.
為鑒定BHK-21細胞中穩定錶達豬白細胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技術從豬的淋巴細胞中剋隆PoIL-2基因,將其連接于pcDNA3.1載體中,併轉染BHK-21細胞.經過G418篩選及RT-PCR鑒定,穫得穩定錶達PoIL-2基因的BHK-21細胞繫.採用實時定量PCR及ELISA測定PoIL-2在BHK-21細胞內的錶達,同時以淋巴細胞增殖試驗(MTT)檢測PoIL-2蛋白活性.試驗結果錶明穩定整閤PoIL-2基因的BHK-21細胞繫其PoIL-2 mRNA的轉錄效率是陰性對照組1.43倍,蛋白錶達量是陰性對照組1.29倍.MTT試驗錶明真覈錶達的PoIL-2促淋巴細胞增殖活性與陰性對照組相比差異極顯著(p＜0.01),錶明BHK-21細胞錶達的PoIL-2具有良好的生物學活性.本研究為開髮新型基因工程疫苗佐劑和抗病毒製劑奠定瞭基礎.
위감정BHK-21세포중은정표체저백세포개소-2(PoIL-2)적활성,본연구이용RT-PCR기술종저적림파세포중극륭PoIL-2기인,장기련접우pcDNA3.1재체중,병전염BHK-21세포.경과G418사선급RT-PCR감정,획득은정표체PoIL-2기인적BHK-21세포계.채용실시정량PCR급ELISA측정PoIL-2재BHK-21세포내적표체,동시이림파세포증식시험(MTT)검측PoIL-2단백활성.시험결과표명은정정합PoIL-2기인적BHK-21세포계기PoIL-2 mRNA적전록효솔시음성대조조1.43배,단백표체량시음성대조조1.29배.MTT시험표명진핵표체적PoIL-2촉림파세포증식활성여음성대조조상비차이겁현저(p＜0.01),표명BHK-21세포표체적PoIL-2구유량호적생물학활성.본연구위개발신형기인공정역묘좌제화항병독제제전정료기출.
