CAJ | 학술논문

目的构建表达多药耐药相关蛋白(MRP)反义RNA的真核表达载体,转染耐药细胞株,初步探讨其影响多药耐药(MDR)的作用机理.方法以MRPcDNA为模板,应用PCR扩增MRP mRNA5′端(含起始子密码)及MRP mRNA 3′端(含终止子密码)片段,通过定向克隆方法,构建表达MRP反义RNA的两个重组载体.通过Lipofectamine将其导入小细胞肺癌(SCLC)耐阿霉素(ADR)的细胞株GLC4/ADR中,经G418筛选,得到分别含pcDNA3空载(M0)、MRP mRNA5′端为靶区的反义RNA(Ma),MRP mRNA3′端为靶区的反义RNA(Mb)的3个细胞克隆.检测细胞内ADR的蓄积改变以及荷瘤裸鼠对ADR的敏感性.结果经RT-PCR检测,外源片段可获稳定表达.Ma细胞及Mb细胞中,MRP表达分别抑制约14.0%和83.0%,且胞内ADR蓄积量均有一定程度的增加;对ADR的耐药倍数与对照细胞M0相比,分别下降9.5%和28.4%.虽然,MRP反义RNA对细胞的生长、细胞周期及ADR诱导的早期凋亡均无明显影响,但可提高荷瘤裸鼠对ADR的敏感性.结论 MRP反义RNA能抑制MRP蛋白的表达,并使转染细胞内ADR浓度增加,从而逆转MRP介导的MDR.对于配合化疗,提高MRP高表达患者的疗效,具有潜在的应用意义.
목적구건표체다약내약상관단백(MRP)반의RNA적진핵표체재체,전염내약세포주,초보탐토기영향다약내약(MDR)적작용궤리.방법이MRPcDNA위모판,응용PCR확증MRP mRNA5′단(함기시자밀마)급MRP mRNA 3′단(함종지자밀마)편단,통과정향극륭방법,구건표체MRP반의RNA적량개중조재체.통과Lipofectamine장기도입소세포폐암(SCLC)내아매소(ADR)적세포주GLC4/ADR중,경G418사선,득도분별함pcDNA3공재(M0)、MRP mRNA5′단위파구적반의RNA(Ma),MRP mRNA3′단위파구적반의RNA(Mb)적3개세포극륭.검측세포내ADR적축적개변이급하류라서대ADR적민감성.결과경RT-PCR검측,외원편단가획은정표체.Ma세포급Mb세포중,MRP표체분별억제약14.0%화83.0%,차포내ADR축적량균유일정정도적증가;대ADR적내약배수여대조세포M0상비,분별하강9.5%화28.4%.수연,MRP반의RNA대세포적생장、세포주기급ADR유도적조기조망균무명현영향,단가제고하류라서대ADR적민감성.결론 MRP반의RNA능억제MRP단백적표체,병사전염세포내ADR농도증가,종이역전MRP개도적MDR.대우배합화료,제고MRP고표체환자적료효,구유잠재적응용의의.