生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
3期
394-397
,共4页
赵洪亮%薛冲%熊向华%张伟%朱厚础%刘志敏
趙洪亮%薛遲%熊嚮華%張偉%硃厚礎%劉誌敏
조홍량%설충%웅향화%장위%주후출%류지민
睫状神经营养因子%巴斯德毕赤酵母%蛋白酶抗性
睫狀神經營養因子%巴斯德畢赤酵母%蛋白酶抗性
첩상신경영양인자%파사덕필적효모%단백매항성
AX15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hCNTF突变体.在巴斯德毕赤酵母中表达时AX15易发生降解.氨基酸序列分析表明降解位于由12和13位氨基酸残基组成的双碱性氨基酸之后.根据KEX2蛋白酶的底物专一性把双碱性氨基酸从RR变为RK,构建了KEX2抗性的AX15突变体AX15(R13K).AX15(R13K)的稳定性得到了显著的提高,在诱导100 h后也未发生降解.利用超滤浓缩和凝胶过滤得到了纯度＞90%的AX15(R13K).TF-1细胞存活实验表明AX15(R13K)具有与AX15相同的生物学活性.蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体可能具有更好的体内稳定性,在临床应用上具有潜在的优势.
AX15是一種比天然睫狀神經營養因子具有更高的生物學活性、更好的穩定性和可溶性的hCNTF突變體.在巴斯德畢赤酵母中錶達時AX15易髮生降解.氨基痠序列分析錶明降解位于由12和13位氨基痠殘基組成的雙堿性氨基痠之後.根據KEX2蛋白酶的底物專一性把雙堿性氨基痠從RR變為RK,構建瞭KEX2抗性的AX15突變體AX15(R13K).AX15(R13K)的穩定性得到瞭顯著的提高,在誘導100 h後也未髮生降解.利用超濾濃縮和凝膠過濾得到瞭純度＞90%的AX15(R13K).TF-1細胞存活實驗錶明AX15(R13K)具有與AX15相同的生物學活性.蛋白酶抗性人睫狀神經營養因子突變體可能具有更好的體內穩定性,在臨床應用上具有潛在的優勢.
AX15시일충비천연첩상신경영양인자구유경고적생물학활성、경호적은정성화가용성적hCNTF돌변체.재파사덕필적효모중표체시AX15역발생강해.안기산서렬분석표명강해위우유12화13위안기산잔기조성적쌍감성안기산지후.근거KEX2단백매적저물전일성파쌍감성안기산종RR변위RK,구건료KEX2항성적AX15돌변체AX15(R13K).AX15(R13K)적은정성득도료현저적제고,재유도100 h후야미발생강해.이용초려농축화응효과려득도료순도＞90%적AX15(R13K).TF-1세포존활실험표명AX15(R13K)구유여AX15상동적생물학활성.단백매항성인첩상신경영양인자돌변체가능구유경호적체내은정성,재림상응용상구유잠재적우세.
