肿瘤防治研究
腫瘤防治研究
종류방치연구
CANCER RESEARCH ON PREVENTION AND TREATMENT
2005年
12期
741-744
,共4页
许丽艳%李恩民%蔡唯佳%牛永东%袁华敏%常静霞%沈忠英%曾毅
許麗豔%李恩民%蔡唯佳%牛永東%袁華敏%常靜霞%瀋忠英%曾毅
허려염%리은민%채유가%우영동%원화민%상정하%침충영%증의
NGAL基因%食管癌细胞%基因表达调控%TPA反应元件
NGAL基因%食管癌細胞%基因錶達調控%TPA反應元件
NGAL기인%식관암세포%기인표체조공%TPA반응원건
目的本文旨在对NGAL基因启动子区及其附近是否存在TPA反应元件进行研究.方法 (1) 采用PCR法从食管癌细胞中克隆NGAL基因5′侧翼区-416～+84片段,然后分别插入质粒pGLB和pGLE, 构建pGLB-416和 pGLE-416荧光素酶报告基因表达载体; (2) 将pGLB-416和 pGLE-416分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109;(3) 用TPA刺激转染的EC109, 检测细胞相对荧光素酶活力,通过相对荧光素酶活力变化判定NGAL基因5′侧翼-416～+84区是否存在TPA反应元件, 同时进行生物信息学分析. 结果无论是pGLB-416还是 pGLE-416, 与pRL-TK共转染食管癌细胞EC109后,用TPA刺激,与其相应的空载体相比,转染细胞荧光素酶活力均极显著升高(t检验,P<0.01),约分别升高46.82和46.41倍;而TPA刺激组与没有TPA刺激组相比,pGLB-416和pGLE-416转染EC109细胞荧光素酶活力分别显著升高了5.17倍和7.37倍 (t检验,P<0.01).生物信息学分析显示,NGAL基因5′侧翼-416～+84区段至少存在4个潜在的TPA反应元件.结论食管癌细胞NGAL基因5′侧翼-416～+84区段存在着TPA反应元件.
目的本文旨在對NGAL基因啟動子區及其附近是否存在TPA反應元件進行研究.方法 (1) 採用PCR法從食管癌細胞中剋隆NGAL基因5′側翼區-416～+84片段,然後分彆插入質粒pGLB和pGLE, 構建pGLB-416和 pGLE-416熒光素酶報告基因錶達載體; (2) 將pGLB-416和 pGLE-416分彆同pRL-TK共轉染食管癌細胞EC109;(3) 用TPA刺激轉染的EC109, 檢測細胞相對熒光素酶活力,通過相對熒光素酶活力變化判定NGAL基因5′側翼-416～+84區是否存在TPA反應元件, 同時進行生物信息學分析. 結果無論是pGLB-416還是 pGLE-416, 與pRL-TK共轉染食管癌細胞EC109後,用TPA刺激,與其相應的空載體相比,轉染細胞熒光素酶活力均極顯著升高(t檢驗,P<0.01),約分彆升高46.82和46.41倍;而TPA刺激組與沒有TPA刺激組相比,pGLB-416和pGLE-416轉染EC109細胞熒光素酶活力分彆顯著升高瞭5.17倍和7.37倍 (t檢驗,P<0.01).生物信息學分析顯示,NGAL基因5′側翼-416～+84區段至少存在4箇潛在的TPA反應元件.結論食管癌細胞NGAL基因5′側翼-416～+84區段存在著TPA反應元件.
목적본문지재대NGAL기인계동자구급기부근시부존재TPA반응원건진행연구.방법 (1) 채용PCR법종식관암세포중극륭NGAL기인5′측익구-416～+84편단,연후분별삽입질립pGLB화pGLE, 구건pGLB-416화 pGLE-416형광소매보고기인표체재체; (2) 장pGLB-416화 pGLE-416분별동pRL-TK공전염식관암세포EC109;(3) 용TPA자격전염적EC109, 검측세포상대형광소매활력,통과상대형광소매활력변화판정NGAL기인5′측익-416～+84구시부존재TPA반응원건, 동시진행생물신식학분석. 결과무론시pGLB-416환시 pGLE-416, 여pRL-TK공전염식관암세포EC109후,용TPA자격,여기상응적공재체상비,전염세포형광소매활력균겁현저승고(t검험,P<0.01),약분별승고46.82화46.41배;이TPA자격조여몰유TPA자격조상비,pGLB-416화pGLE-416전염EC109세포형광소매활력분별현저승고료5.17배화7.37배 (t검험,P<0.01).생물신식학분석현시,NGAL기인5′측익-416～+84구단지소존재4개잠재적TPA반응원건.결론식관암세포NGAL기인5′측익-416～+84구단존재착TPA반응원건.
