CAJ | 학술논문

目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化.方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物.以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将所获阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot鉴定.最后用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化.结果:成功构建了TCS突变体(TCSYFF81-83ACS),并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白.结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径.
목적:구건천화분단백(TCS)돌변체,병장기재원핵계통내진행표체급순화.방법:차조계산궤예측TCS가능적항원결정족(YFF81-83)병설계출괄당적돌변인물.이괄루기인조DNA위모판,이용중조PCR기술확증TCS돌변체전장기인,경BamH Ⅰ화EcoR Ⅰ쌍매절후여원핵표체재체pRSET-A련접,전화감수태E.coliDH5α,제취질립진행매절감정급측서.장소획양성중조질립전화감수태E.coli BL21(DE3),경IPTG유도표체후,대표체산물진행Western blot감정.최후용Ni-NTA친화층석주대소획돌변체단백진행순화.결과:성공구건료TCS돌변체(TCSYFF81-83ACS),병획득료돌변체단백재대장간균내적가용성고효표체,경Ni-NTA친화층석주순화후,산생출대량균일적TCS돌변체단백.결론:TCS적정점돌변급기재원핵계통내적표체,위기인공정방법개조TCS제공료신적도경.