解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2010年
4期
606-610
,共5页
王齐%廖华%秦建强%余磊%艾鹤英%汪海仪%邱小忠
王齊%廖華%秦建彊%餘磊%艾鶴英%汪海儀%邱小忠
왕제%료화%진건강%여뢰%애학영%왕해의%구소충
Sylgard 184%铸型%Matrigel%肌组织%反转录-聚合酶链式反应%免疫荧光%C2C12细胞
Sylgard 184%鑄型%Matrigel%肌組織%反轉錄-聚閤酶鏈式反應%免疫熒光%C2C12細胞
Sylgard 184%주형%Matrigel%기조직%반전록-취합매련식반응%면역형광%C2C12세포
目的 利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织. 方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态, RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接. 结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达. 结论 修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构.
目的 利用脩飾併鑄型後的Sylgard 184凹槽與C2C12細胞複閤培養、誘導分化,穫取三維極性骨骼肌組織. 方法 Sylgard 184雙組分以10∶1的比例均勻混閤併倒闆,室溫下靜置固化併對其錶麵壓槽鑄型,Hank液遲洗凹槽,Matrigel和膠原的混閤液均勻鋪被凹槽底部,置生物安全櫃待細胞基質自然榦燥、紫外線照射消毒1h以上時接種C2C12細胞懸液,細胞增殖約80%彙閤時改用分化培養基進行分化誘導,倒置顯微鏡下觀察肌管的分化狀態, RT-PCR方法檢測肌管內myogenin和desmin基因mRNAs的錶達,免疫熒光檢測生肌轉錄因子myogenin和desmin蛋白的錶達,掃描電鏡觀察肌管形態和肌管間的連接. 結果 C2C12細胞在Sylgard 184彈性體鑄型壓槽中培養分化7d後,倒置顯微鏡下可見肌管呈極性分化,且肌管之間融閤緊密;21d後,掃描電鏡檢測可見肌管之間排列緊密且相互重疊,形成膜樣結構,厚度可達0.15mm,具有三維性;RT-PCR、免疫熒光檢測證實極性分化肌管內具有myogenin和desmin的暘性錶達. 結論 脩飾併鑄型的Sylgard 184凹槽具有一定的方嚮引導效應,能促進C2C12細胞分化形成多覈肌管,且肌管呈極性重疊排列,形成三維極性骨骼肌組織結構.
목적 이용수식병주형후적Sylgard 184요조여C2C12세포복합배양、유도분화,획취삼유겁성골격기조직. 방법 Sylgard 184쌍조분이10∶1적비례균균혼합병도판,실온하정치고화병대기표면압조주형,Hank액충세요조,Matrigel화효원적혼합액균균포피요조저부,치생물안전거대세포기질자연간조、자외선조사소독1h이상시접충C2C12세포현액,세포증식약80%회합시개용분화배양기진행분화유도,도치현미경하관찰기관적분화상태, RT-PCR방법검측기관내myogenin화desmin기인mRNAs적표체,면역형광검측생기전록인자myogenin화desmin단백적표체,소묘전경관찰기관형태화기관간적련접. 결과 C2C12세포재Sylgard 184탄성체주형압조중배양분화7d후,도치현미경하가견기관정겁성분화,차기관지간융합긴밀;21d후,소묘전경검측가견기관지간배렬긴밀차상호중첩,형성막양결구,후도가체0.15mm,구유삼유성;RT-PCR、면역형광검측증실겁성분화기관내구유myogenin화desmin적양성표체. 결론 수식병주형적Sylgard 184요조구유일정적방향인도효응,능촉진C2C12세포분화형성다핵기관,차기관정겁성중첩배렬,형성삼유겁성골격기조직결구.
