渔业科学进展
漁業科學進展
어업과학진전
MARINE FISHERIES RESEARCH
2011年
5期
97-107
,共11页
仿刺参%MnSOD%基因克隆%序列分析
倣刺參%MnSOD%基因剋隆%序列分析
방자삼%MnSOD%기인극륭%서렬분석
以仿刺参Apostichopus japonicus为材料,利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法首次得到仿刺参MnSOD的全长cDNA.该全长cDNA大小为955bp,其中5′端非编码区67 bp,3′端非编码区216 bp,开放阅读框(ORF)672bp,在3 ′端有多聚腺苷酸信号序列ATTTA,并有polyA加尾,符合有效翻译的基因全长cDNA的特征.MnSOD全长cDNA可编码223个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子质量为24.64kD,理论等电点是6.66,为亲水性蛋白.该蛋白序列没有信号肽和跨膜结构,仅有一段线粒体导肽.其二级结构主要以α-螺旋为主,无规则卷曲和延伸链构成了蛋白中量最大的结构元件,不含β-折叠.仿刺参SOD的氨基酸序列与目前已报道的其他物种如人、牛、斑马鱼、原鸡、非洲爪蟾、中国对虾、皱纹盘鲍、海湾扇贝、果蝇等的MnSOD氨基酸序列进行序列比对的结果表明,相似性均在61％～69％o之间,说明该基因在各物种间具有一定的保守性.该段氨基酸序列无N-糖基化位点,含有3个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,5个肉豆蔻酰基化位点,还发现了1个SOD家族的特征肽段DVWEHAYY.对磷酸化位点分析发现,有1个丝氨酸Ser,3个苏氨酸Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化位点.二硫键分析表明,SOD含有3个半胱氨酸Cys,形成1个二硫键,连接着第17位和第107位的Cys.仿刺参MnSOD全长cDNA的克隆为更好地理解生物体内防御系统的催化O2-发生歧化反应、消除活性氧、维持机体活性氧代谢的平衡提供了理论基础.
以倣刺參Apostichopus japonicus為材料,利用cDNA末耑快速擴增(RACE)方法首次得到倣刺參MnSOD的全長cDNA.該全長cDNA大小為955bp,其中5′耑非編碼區67 bp,3′耑非編碼區216 bp,開放閱讀框(ORF)672bp,在3 ′耑有多聚腺苷痠信號序列ATTTA,併有polyA加尾,符閤有效翻譯的基因全長cDNA的特徵.MnSOD全長cDNA可編碼223箇氨基痠的前體蛋白,預測蛋白分子質量為24.64kD,理論等電點是6.66,為親水性蛋白.該蛋白序列沒有信號肽和跨膜結構,僅有一段線粒體導肽.其二級結構主要以α-螺鏇為主,無規則捲麯和延伸鏈構成瞭蛋白中量最大的結構元件,不含β-摺疊.倣刺參SOD的氨基痠序列與目前已報道的其他物種如人、牛、斑馬魚、原鷄、非洲爪蟾、中國對蝦、皺紋盤鮑、海灣扇貝、果蠅等的MnSOD氨基痠序列進行序列比對的結果錶明,相似性均在61％～69％o之間,說明該基因在各物種間具有一定的保守性.該段氨基痠序列無N-糖基化位點,含有3箇蛋白激酶C燐痠化位點,1箇酪氨痠蛋白激酶Ⅱ燐痠化位點,5箇肉豆蔻酰基化位點,還髮現瞭1箇SOD傢族的特徵肽段DVWEHAYY.對燐痠化位點分析髮現,有1箇絲氨痠Ser,3箇囌氨痠Tyr可能成為蛋白激酶燐痠化位點.二硫鍵分析錶明,SOD含有3箇半胱氨痠Cys,形成1箇二硫鍵,連接著第17位和第107位的Cys.倣刺參MnSOD全長cDNA的剋隆為更好地理解生物體內防禦繫統的催化O2-髮生歧化反應、消除活性氧、維持機體活性氧代謝的平衡提供瞭理論基礎.
이방자삼Apostichopus japonicus위재료,이용cDNA말단쾌속확증(RACE)방법수차득도방자삼MnSOD적전장cDNA.해전장cDNA대소위955bp,기중5′단비편마구67 bp,3′단비편마구216 bp,개방열독광(ORF)672bp,재3 ′단유다취선감산신호서렬ATTTA,병유polyA가미,부합유효번역적기인전장cDNA적특정.MnSOD전장cDNA가편마223개안기산적전체단백,예측단백분자질량위24.64kD,이론등전점시6.66,위친수성단백.해단백서렬몰유신호태화과막결구,부유일단선립체도태.기이급결구주요이α-라선위주,무규칙권곡화연신련구성료단백중량최대적결구원건,불함β-절첩.방자삼SOD적안기산서렬여목전이보도적기타물충여인、우、반마어、원계、비주조섬、중국대하、추문반포、해만선패、과승등적MnSOD안기산서렬진행서렬비대적결과표명,상사성균재61％～69％o지간,설명해기인재각물충간구유일정적보수성.해단안기산서렬무N-당기화위점,함유3개단백격매C린산화위점,1개락안산단백격매Ⅱ린산화위점,5개육두구선기화위점,환발현료1개SOD가족적특정태단DVWEHAYY.대린산화위점분석발현,유1개사안산Ser,3개소안산Tyr가능성위단백격매린산화위점.이류건분석표명,SOD함유3개반광안산Cys,형성1개이류건,련접착제17위화제107위적Cys.방자삼MnSOD전장cDNA적극륭위경호지리해생물체내방어계통적최화O2-발생기화반응、소제활성양、유지궤체활성양대사적평형제공료이론기출.
