国际泌尿系统杂志
國際泌尿繫統雜誌
국제비뇨계통잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF UROLOGY AND NEPHROLOGY
2006年
5期
577-580
,共4页
魏佳莉%彭佑铭%刘伏友%肖力
魏佳莉%彭祐銘%劉伏友%肖力
위가리%팽우명%류복우%초력
结缔组织%生长物质%质粒%遗传载体%RINA%肾炎,间质性
結締組織%生長物質%質粒%遺傳載體%RINA%腎炎,間質性
결체조직%생장물질%질립%유전재체%RINA%신염,간질성
目的 构建表达CTGF shRNA的pBSHH1重组真核表达载体,为获得最佳CTGF基因的siRNA序列和RNAi治疗肾小管间质纤维化提供实验基础.方法 从CTGF基因中筛选出4个符合RNAi条件的片段,分别设计4对寡核苷酸,退火后形成双链,两端带有BglⅡ和HindⅢ酶切位点,将上述4对寡核苷酸依次连入BglⅡ和HindⅢ双酶切后线形化的pBSHH1载体,构建成能在细胞内产生CTGF shRNA的质粒,依次命名为pBSHH1-T-1、2、3、4.酶切鉴定,测序证实.结果 pBSHH1-T-1、2、3、4经限制性内切酶HindⅢ和EcoRI酶切,电泳后显示连接了双链DNA的280bp条带,进一步测序并证实重组质粒连接正确.结论 成功构建了四个能在细胞内表达CTGF shRNA的pBSHH1质粒载体,为获得最佳的CTGF基因的siRNA序列和进一步RNAi治疗肾小管间质纤维化奠定了基础.
目的 構建錶達CTGF shRNA的pBSHH1重組真覈錶達載體,為穫得最佳CTGF基因的siRNA序列和RNAi治療腎小管間質纖維化提供實驗基礎.方法 從CTGF基因中篩選齣4箇符閤RNAi條件的片段,分彆設計4對寡覈苷痠,退火後形成雙鏈,兩耑帶有BglⅡ和HindⅢ酶切位點,將上述4對寡覈苷痠依次連入BglⅡ和HindⅢ雙酶切後線形化的pBSHH1載體,構建成能在細胞內產生CTGF shRNA的質粒,依次命名為pBSHH1-T-1、2、3、4.酶切鑒定,測序證實.結果 pBSHH1-T-1、2、3、4經限製性內切酶HindⅢ和EcoRI酶切,電泳後顯示連接瞭雙鏈DNA的280bp條帶,進一步測序併證實重組質粒連接正確.結論 成功構建瞭四箇能在細胞內錶達CTGF shRNA的pBSHH1質粒載體,為穫得最佳的CTGF基因的siRNA序列和進一步RNAi治療腎小管間質纖維化奠定瞭基礎.
목적 구건표체CTGF shRNA적pBSHH1중조진핵표체재체,위획득최가CTGF기인적siRNA서렬화RNAi치료신소관간질섬유화제공실험기출.방법 종CTGF기인중사선출4개부합RNAi조건적편단,분별설계4대과핵감산,퇴화후형성쌍련,량단대유BglⅡ화HindⅢ매절위점,장상술4대과핵감산의차련입BglⅡ화HindⅢ쌍매절후선형화적pBSHH1재체,구건성능재세포내산생CTGF shRNA적질립,의차명명위pBSHH1-T-1、2、3、4.매절감정,측서증실.결과 pBSHH1-T-1、2、3、4경한제성내절매HindⅢ화EcoRI매절,전영후현시련접료쌍련DNA적280bp조대,진일보측서병증실중조질립련접정학.결론 성공구건료사개능재세포내표체CTGF shRNA적pBSHH1질립재체,위획득최가적CTGF기인적siRNA서렬화진일보RNAi치료신소관간질섬유화전정료기출.
