CAJ | 학술논문

目的探讨抗VEGF抗体及抗VEGF发夹状核酶基因对K562细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响及其分子机制.方法将不同浓度的VEGF抗体作用于K562细胞,应用脂质体介导的方法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体pcDNA-RZ转染K562细胞,采用MTT法、甲基纤维素半固体培养法和细胞周期测定分析抗VEGF抗体及发夹状核酶基因对白血病细胞增殖的影响;DNA凝胶电泳和AnnexinV标记法检测白血病细胞的凋亡程度;RT-PCR法测定K562细胞中相关基因表达的变化.结果抗VEGF抗体能抑制K562细胞生长,促进其凋亡,这一作用呈剂量依赖关系.0.165μg/ml VEGF抗体作用于K562细胞72 h,DNA凝胶电泳出现梯状条带,当抗体浓度增加到0.825μg/ml时,梯状条带更为清晰;RT-PCR显示,VEGF抗体作用后,K562细胞MRP、TOPOⅡ基因的表达较对照组下调,而GST基因表达无明显改变.与K562及K562/PC细胞(转染空质粒的K562细胞)相比,转染抗VEGF核酶基因的K562/RZ细胞VEGF mRNA和蛋白的表达量明显降低;生长曲线提示K562/RZ细胞生长缓慢,甲基纤维素集落形成率较对照组明显下降,对照组集落形成率为(30.5±3.3)%,而K562/RZ组为(16.3±2.8)%,细胞周期动力学分析结果显示K562/RZ细胞G1期细胞增多,S期细胞显著减少;在小剂量As2O3作用下,K562/RZ细胞凋亡数量较对照明显增高(凋亡率对照组为13.4%,K562/RZ组为31.5%).结论抗VEGF抗体阻断K562细胞VEGF自分泌环路或者抗VEGF发夹状核酶减少K562细胞中VEGF的合成,能抑制K562细胞的增殖,促进K562细胞的凋亡,引起部分与细胞凋亡和多药耐药相关的基因表达改变.
목적 탐토항VEGF항체급항VEGF발협상핵매기인대K562세포증식、조망급상관기인표체적영향급기분자궤제.방법 장불동농도적VEGF항체작용우K562세포,응용지질체개도적방법장항VEGF발협상핵매기인진핵표체재체pcDNA-RZ전염K562세포,채용MTT법、갑기섬유소반고체배양법화세포주기측정분석항VEGF항체급발협상핵매기인대백혈병세포증식적영향;DNA응효전영화AnnexinV표기법검측백혈병세포적조망정도;RT-PCR법측정K562세포중상관기인표체적변화.결과 항VEGF항체능억제K562세포생장,촉진기조망,저일작용정제량의뢰관계.0.165μg/ml VEGF항체작용우K562세포72 h,DNA응효전영출현제상조대,당항체농도증가도0.825μg/ml시,제상조대경위청석;RT-PCR현시,VEGF항체작용후,K562세포MRP、TOPOⅡ기인적표체교대조조하조,이GST기인표체무명현개변.여K562급K562/PC세포(전염공질립적K562세포)상비,전염항VEGF핵매기인적K562/RZ세포VEGF mRNA화단백적표체량명현강저;생장곡선제시K562/RZ세포생장완만,갑기섬유소집락형성솔교대조조명현하강,대조조집락형성솔위(30.5±3.3)%,이K562/RZ조위(16.3±2.8)%,세포주기동역학분석결과현시K562/RZ세포G1기세포증다,S기세포현저감소;재소제량As2O3작용하,K562/RZ세포조망수량교대조명현증고(조망솔대조조위13.4%,K562/RZ조위31.5%).결론 항VEGF항체조단K562세포VEGF자분비배로혹자항VEGF발협상핵매감소K562세포중VEGF적합성,능억제K562세포적증식,촉진K562세포적조망,인기부분여세포조망화다약내약상관적기인표체개변.