中国兽医科技
中國獸醫科技
중국수의과기
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE AND TECHNOLOGY
2005年
11期
869-874
,共6页
传染性胃肠炎病毒%猪%M基因%克隆%测序%原核表达
傳染性胃腸炎病毒%豬%M基因%剋隆%測序%原覈錶達
전염성위장염병독%저%M기인%극륭%측서%원핵표체
构建了TGEV TH-98株M基因序列的原核表达载体,利用RT-PCR方法从TGEV TH-98株中扩增出M蛋白基因,并亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白.结果表明,从TGE TH-98株克隆到了M基因 cDNA,该基因全长789 bp,与T014株、Purdue株、TFI株和96-1933株的M基因同源性分别为92.37%、98.35%、99.87%和96.96%.SDS-PAGE电泳结果显示,重组表达质粒获得了约57 ku的目的带,其中M蛋白的分子质量约为31 ku,与预期的结果一致;Western-blotting分析表明,融合表达产物可与TGEV全病毒制备的阳性血清发生反应.证实,TGEV的M基因高度保守,构建的M基因原核表达载体pGEX-6P-TM能在大肠埃希氏菌中获得高效表达.
構建瞭TGEV TH-98株M基因序列的原覈錶達載體,利用RT-PCR方法從TGEV TH-98株中擴增齣M蛋白基因,併亞剋隆至原覈錶達載體pGEX-6P-1上,轉化大腸埃希氏菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG誘導重組菌株錶達瞭融閤蛋白.結果錶明,從TGE TH-98株剋隆到瞭M基因 cDNA,該基因全長789 bp,與T014株、Purdue株、TFI株和96-1933株的M基因同源性分彆為92.37%、98.35%、99.87%和96.96%.SDS-PAGE電泳結果顯示,重組錶達質粒穫得瞭約57 ku的目的帶,其中M蛋白的分子質量約為31 ku,與預期的結果一緻;Western-blotting分析錶明,融閤錶達產物可與TGEV全病毒製備的暘性血清髮生反應.證實,TGEV的M基因高度保守,構建的M基因原覈錶達載體pGEX-6P-TM能在大腸埃希氏菌中穫得高效錶達.
구건료TGEV TH-98주M기인서렬적원핵표체재체,이용RT-PCR방법종TGEV TH-98주중확증출M단백기인,병아극륭지원핵표체재체pGEX-6P-1상,전화대장애희씨균BL21(DE3)pLysS,용IPTG유도중조균주표체료융합단백.결과표명,종TGE TH-98주극륭도료M기인 cDNA,해기인전장789 bp,여T014주、Purdue주、TFI주화96-1933주적M기인동원성분별위92.37%、98.35%、99.87%화96.96%.SDS-PAGE전영결과현시,중조표체질립획득료약57 ku적목적대,기중M단백적분자질량약위31 ku,여예기적결과일치;Western-blotting분석표명,융합표체산물가여TGEV전병독제비적양성혈청발생반응.증실,TGEV적M기인고도보수,구건적M기인원핵표체재체pGEX-6P-TM능재대장애희씨균중획득고효표체.
