生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2006年
7期
627-634
,共8页
陈峰%余军平%方晓红%张贵友
陳峰%餘軍平%方曉紅%張貴友
진봉%여군평%방효홍%장귀우
TSH1%AP2/EREBP%转录因子%原子力显微镜
TSH1%AP2/EREBP%轉錄因子%原子力顯微鏡
TSH1%AP2/EREBP%전록인자%원자력현미경
TSH1,是通过搜寻GenBank的EST库而获得的一个来源于水稻的含AP2/EREBP保守结构域的蛋白质.为了详细分析TSH1蛋白与其DNA顺式元件的结合特性,首先采用传统的凝胶阻滞实验和酵母单杂交技术,证实TSH1在体内和体外均专一性地结合于GCC元件,然后利用原子力显微镜技术精确测量了TSH1蛋白与GCC元件在单分子水平的相互作用力.结果表明,GST-TSH1与DRE元件没有特异性的结合,而GST-TSH1与GCC元件结合力的大小为(83.9±2.2)pN,这种特异性的结合可以被加入的游离TSH1蛋白明显降低.GST蛋白和突变GCC元件作为负对照显示出与GCC元件无特异性作用力.以上结果充分证明,TSH1是专一性地与GCC元件相作用的转录因子,而且原子力显微镜对于检测转录因子与DNA相互作用时单碱基的突变十分灵敏.通过比较几种评估转录因子与DNA顺式元件结合特异性的方法,阐述了原子力显微镜技术的特点及优越性.
TSH1,是通過搜尋GenBank的EST庫而穫得的一箇來源于水稻的含AP2/EREBP保守結構域的蛋白質.為瞭詳細分析TSH1蛋白與其DNA順式元件的結閤特性,首先採用傳統的凝膠阻滯實驗和酵母單雜交技術,證實TSH1在體內和體外均專一性地結閤于GCC元件,然後利用原子力顯微鏡技術精確測量瞭TSH1蛋白與GCC元件在單分子水平的相互作用力.結果錶明,GST-TSH1與DRE元件沒有特異性的結閤,而GST-TSH1與GCC元件結閤力的大小為(83.9±2.2)pN,這種特異性的結閤可以被加入的遊離TSH1蛋白明顯降低.GST蛋白和突變GCC元件作為負對照顯示齣與GCC元件無特異性作用力.以上結果充分證明,TSH1是專一性地與GCC元件相作用的轉錄因子,而且原子力顯微鏡對于檢測轉錄因子與DNA相互作用時單堿基的突變十分靈敏.通過比較幾種評估轉錄因子與DNA順式元件結閤特異性的方法,闡述瞭原子力顯微鏡技術的特點及優越性.
TSH1,시통과수심GenBank적EST고이획득적일개래원우수도적함AP2/EREBP보수결구역적단백질.위료상세분석TSH1단백여기DNA순식원건적결합특성,수선채용전통적응효조체실험화효모단잡교기술,증실TSH1재체내화체외균전일성지결합우GCC원건,연후이용원자력현미경기술정학측량료TSH1단백여GCC원건재단분자수평적상호작용력.결과표명,GST-TSH1여DRE원건몰유특이성적결합,이GST-TSH1여GCC원건결합력적대소위(83.9±2.2)pN,저충특이성적결합가이피가입적유리TSH1단백명현강저.GST단백화돌변GCC원건작위부대조현시출여GCC원건무특이성작용력.이상결과충분증명,TSH1시전일성지여GCC원건상작용적전록인자,이차원자력현미경대우검측전록인자여DNA상호작용시단감기적돌변십분령민.통과비교궤충평고전록인자여DNA순식원건결합특이성적방법,천술료원자력현미경기술적특점급우월성.
