水产学报
水產學報
수산학보
JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA
2008年
3期
464-470
,共7页
杜雪莉%周利亘%王锡昌%熊何健%苏文金%曹敏杰
杜雪莉%週利亙%王錫昌%熊何健%囌文金%曹敏傑
두설리%주리긍%왕석창%웅하건%소문금%조민걸
黄鳍鲷%伴肌动蛋白%纯化%抗体
黃鰭鯛%伴肌動蛋白%純化%抗體
황기조%반기동단백%순화%항체
采用Sephacryl S-400凝胶过滤柱层析和电洗脱等纯化方法,首次从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化到伴肌动蛋白,并制备了特异性多克隆抗体.多克隆抗体经Protein A-Sepharose亲和层析柱纯化得到高纯度免疫球蛋白G(IgG).采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫斑点印迹(Dot-Blot)和免疫印迹(Western-Blot)等方法对纯化的伴肌动蛋白及其多克隆抗体进行分析鉴定,并研究了不同贮藏条件下伴肌动蛋白的变化情况.SDS-PAGE结果显示本研究从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化了高纯度伴肌动蛋白;Dot-Blot检测结果显示兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体效价为5×104;Western-blot检测表明兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体能与肌原纤维蛋白中的伴肌动蛋白发生特异性反应,而与其它蛋白不发生免疫交叉反应.
採用Sephacryl S-400凝膠過濾柱層析和電洗脫等純化方法,首次從黃鰭鯛骨骼肌中分離純化到伴肌動蛋白,併製備瞭特異性多剋隆抗體.多剋隆抗體經Protein A-Sepharose親和層析柱純化得到高純度免疫毬蛋白G(IgG).採用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、免疫斑點印跡(Dot-Blot)和免疫印跡(Western-Blot)等方法對純化的伴肌動蛋白及其多剋隆抗體進行分析鑒定,併研究瞭不同貯藏條件下伴肌動蛋白的變化情況.SDS-PAGE結果顯示本研究從黃鰭鯛骨骼肌中分離純化瞭高純度伴肌動蛋白;Dot-Blot檢測結果顯示兔抗黃鰭鯛伴肌動蛋白多剋隆抗體效價為5×104;Western-blot檢測錶明兔抗黃鰭鯛伴肌動蛋白多剋隆抗體能與肌原纖維蛋白中的伴肌動蛋白髮生特異性反應,而與其它蛋白不髮生免疫交扠反應.
채용Sephacryl S-400응효과려주층석화전세탈등순화방법,수차종황기조골격기중분리순화도반기동단백,병제비료특이성다극륭항체.다극륭항체경Protein A-Sepharose친화층석주순화득도고순도면역구단백G(IgG).채용취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、면역반점인적(Dot-Blot)화면역인적(Western-Blot)등방법대순화적반기동단백급기다극륭항체진행분석감정,병연구료불동저장조건하반기동단백적변화정황.SDS-PAGE결과현시본연구종황기조골격기중분리순화료고순도반기동단백;Dot-Blot검측결과현시토항황기조반기동단백다극륭항체효개위5×104;Western-blot검측표명토항황기조반기동단백다극륭항체능여기원섬유단백중적반기동단백발생특이성반응,이여기타단백불발생면역교차반응.
