中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2008年
11期
2245-2250
,共6页
主余华%任万华%张春清%石军%孙成刚
主餘華%任萬華%張春清%石軍%孫成剛
주여화%임만화%장춘청%석군%손성강
RNA干扰%短发夹RNA%结缔组织生长因子%肝星状细胞%转化生长因子β%细胞外基质
RNA榦擾%短髮夾RNA%結締組織生長因子%肝星狀細胞%轉化生長因子β%細胞外基質
RNA간우%단발협RNA%결체조직생장인자%간성상세포%전화생장인자β%세포외기질
目的:利用pEGFP质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹BNA表达的质粒,筛选有效的抑制序列后,研究其对IISC-T6中TCF-β1、CTGF及细胞外基质表达的影响.方法:1.分别设计3对针对CTGF的有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列,构建重组体成功后转染HSC-T6,24 h后通过RT-PCR及Western blotting分析HSC-T6 CTGFmRNA及蛋白表达水平,筛选出有效抑制CTGF表达的序列.2.将已构建并筛选出有最高抑制效率的pEGFP-CTGFshRNA转染HSC-T6,培养24、48 h后用RT-PCR和/或Westernblotting检测各组细胞中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因的表达;放免法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层黏连蛋白的含量.结果:将构建成功的3组pECFP-CTGFshRNA转染肝星状细胞后,筛选出两组能高效抑制CTGF表达的序列;pEGFP-CTGFshRNA能明显抑制HSC-T6 CTGF、Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层黏连蛋白的含量(P＜0.01或P＜0.05),而对TGF-β1的基因表达则无影响.结论:pEGFP-CTGFshRNA能高效抑制肝星状细胞中CTGF及细胞外基质的表达;CTG-FshRNA介导的RNA干扰有望对慢性肝病所致肝纤维化具有治疗潜力.
目的:利用pEGFP質粒載體構建介導結締組織生長因子(CTGF)短髮夾BNA錶達的質粒,篩選有效的抑製序列後,研究其對IISC-T6中TCF-β1、CTGF及細胞外基質錶達的影響.方法:1.分彆設計3對針對CTGF的有小髮夾結構的兩條DNA序列及1對非特異對照序列,構建重組體成功後轉染HSC-T6,24 h後通過RT-PCR及Western blotting分析HSC-T6 CTGFmRNA及蛋白錶達水平,篩選齣有效抑製CTGF錶達的序列.2.將已構建併篩選齣有最高抑製效率的pEGFP-CTGFshRNA轉染HSC-T6,培養24、48 h後用RT-PCR和/或Westernblotting檢測各組細胞中TGF-β1、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原基因的錶達;放免法分析細胞上清液中Ⅲ型前膠原、Ⅳ型膠原、透明質痠和層黏連蛋白的含量.結果:將構建成功的3組pECFP-CTGFshRNA轉染肝星狀細胞後,篩選齣兩組能高效抑製CTGF錶達的序列;pEGFP-CTGFshRNA能明顯抑製HSC-T6 CTGF、Ⅰ型、Ⅲ型膠原mRNA及蛋白的錶達,降低上清液中Ⅲ型前膠原、Ⅳ型膠原、透明質痠和層黏連蛋白的含量(P＜0.01或P＜0.05),而對TGF-β1的基因錶達則無影響.結論:pEGFP-CTGFshRNA能高效抑製肝星狀細胞中CTGF及細胞外基質的錶達;CTG-FshRNA介導的RNA榦擾有望對慢性肝病所緻肝纖維化具有治療潛力.
목적:이용pEGFP질립재체구건개도결체조직생장인자(CTGF)단발협BNA표체적질립,사선유효적억제서렬후,연구기대IISC-T6중TCF-β1、CTGF급세포외기질표체적영향.방법:1.분별설계3대침대CTGF적유소발협결구적량조DNA서렬급1대비특이대조서렬,구건중조체성공후전염HSC-T6,24 h후통과RT-PCR급Western blotting분석HSC-T6 CTGFmRNA급단백표체수평,사선출유효억제CTGF표체적서렬.2.장이구건병사선출유최고억제효솔적pEGFP-CTGFshRNA전염HSC-T6,배양24、48 h후용RT-PCR화/혹Westernblotting검측각조세포중TGF-β1、Ⅰ형효원、Ⅲ형효원기인적표체;방면법분석세포상청액중Ⅲ형전효원、Ⅳ형효원、투명질산화층점련단백적함량.결과:장구건성공적3조pECFP-CTGFshRNA전염간성상세포후,사선출량조능고효억제CTGF표체적서렬;pEGFP-CTGFshRNA능명현억제HSC-T6 CTGF、Ⅰ형、Ⅲ형효원mRNA급단백적표체,강저상청액중Ⅲ형전효원、Ⅳ형효원、투명질산화층점련단백적함량(P＜0.01혹P＜0.05),이대TGF-β1적기인표체칙무영향.결론:pEGFP-CTGFshRNA능고효억제간성상세포중CTGF급세포외기질적표체;CTG-FshRNA개도적RNA간우유망대만성간병소치간섬유화구유치료잠력.
