军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2010年
6期
516-518,522
,共4页
严瑞芬%屈武斌%吴永红%刘虎岐%张成岗
嚴瑞芬%屈武斌%吳永紅%劉虎岐%張成崗
엄서분%굴무빈%오영홍%류호기%장성강
锚定%多重PCR%核酸扩增技术%相对分子质量标准%大肠杆菌%敏感性与特异性
錨定%多重PCR%覈痠擴增技術%相對分子質量標準%大腸桿菌%敏感性與特異性
묘정%다중PCR%핵산확증기술%상대분자질량표준%대장간균%민감성여특이성
目的 利用5'端锚定引物及多重聚合酶链反应(PCR)技术建立高效、特异性扩增核酸片段的方法,并探讨其在核酸相对分子质量(Mr)标准(DNA标志物)制备中的应用.方法 针对常用的pMD19-T载体(2692 bp)序列,利用命令行程序pd4marker.py,结合Primer3及多因素引物特异性评估软件MFEprimer,设计5'端锚定的上游引物和7对扩增不同目的 片段的下游引物;其次,以转化有pMD19-T载体的大肠杆菌DH5α菌液为模板,分别进行一至七重PCR扩增;并将扩增产物经2%琼脂糖凝胶分离及凝胶成像仪采集图像分析;最后,评估该方法在核酸Mr标准制备中的应用.结果 制备了特异性较好的一至七重PCR扩增产物,可针对不同实验目的 进行不同核酸Mr标准的制备.结论 建立了一种快速、特异性扩增核酸片段的锚定多重PCR方法,可根据不同实验目的 ,快速制备出不同Mr标准大小的核酸片段,进一步拓展了PCR技术的应用范围.
目的 利用5'耑錨定引物及多重聚閤酶鏈反應(PCR)技術建立高效、特異性擴增覈痠片段的方法,併探討其在覈痠相對分子質量(Mr)標準(DNA標誌物)製備中的應用.方法 針對常用的pMD19-T載體(2692 bp)序列,利用命令行程序pd4marker.py,結閤Primer3及多因素引物特異性評估軟件MFEprimer,設計5'耑錨定的上遊引物和7對擴增不同目的 片段的下遊引物;其次,以轉化有pMD19-T載體的大腸桿菌DH5α菌液為模闆,分彆進行一至七重PCR擴增;併將擴增產物經2%瓊脂糖凝膠分離及凝膠成像儀採集圖像分析;最後,評估該方法在覈痠Mr標準製備中的應用.結果 製備瞭特異性較好的一至七重PCR擴增產物,可針對不同實驗目的 進行不同覈痠Mr標準的製備.結論 建立瞭一種快速、特異性擴增覈痠片段的錨定多重PCR方法,可根據不同實驗目的 ,快速製備齣不同Mr標準大小的覈痠片段,進一步拓展瞭PCR技術的應用範圍.
목적 이용5'단묘정인물급다중취합매련반응(PCR)기술건립고효、특이성확증핵산편단적방법,병탐토기재핵산상대분자질량(Mr)표준(DNA표지물)제비중적응용.방법 침대상용적pMD19-T재체(2692 bp)서렬,이용명령행정서pd4marker.py,결합Primer3급다인소인물특이성평고연건MFEprimer,설계5'단묘정적상유인물화7대확증불동목적 편단적하유인물;기차,이전화유pMD19-T재체적대장간균DH5α균액위모판,분별진행일지칠중PCR확증;병장확증산물경2%경지당응효분리급응효성상의채집도상분석;최후,평고해방법재핵산Mr표준제비중적응용.결과 제비료특이성교호적일지칠중PCR확증산물,가침대불동실험목적 진행불동핵산Mr표준적제비.결론 건립료일충쾌속、특이성확증핵산편단적묘정다중PCR방법,가근거불동실험목적 ,쾌속제비출불동Mr표준대소적핵산편단,진일보탁전료PCR기술적응용범위.
