CAJ | 학술논문

目的:构建pET32a(+)-hDll l(DSL)原核表达载体,表达、纯化hDll l(DSL)蛋白,观察其对脐带血CD34(+)细胞的休外扩增作用.方法:克隆hDll 1(DSL),构建pET32a(+)-hdll1(DSL),重组表达载体.转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.重组信号结合蛋白(RBP-J)报告基因实验及Notch下游分子Her1检测证实hDlll(DSL)活性.磁珠分选脐带血CD34+细胞,加入hdll1(DSL)或联合干细胞因子(SCF),FIt3配体(FL)、血小板生成表(TPO)孵育1周,观察体外扩增作用.结果:成功克隆hDlll(DSL),并构建了pET32a(+)- hDll1(DSL)重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx- hDll1(DSL)融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1(DSL)融合蛋白.配体活性实验显示,可溶性的Trx-hdll1(DSL)蛋白可以激活RBP-J报告墓因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路.此外,Trx-hDll1(DSL)融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用.结论:成功构建了pET32a(+)-hDll1(DSL)重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDill1(DSL)融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血于/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础.
목적:구건pET32a(+)-hDll l(DSL)원핵표체재체,표체、순화hDll l(DSL)단백,관찰기대제대혈CD34(+)세포적휴외확증작용.방법:극륭hDll 1(DSL),구건pET32a(+)-hdll1(DSL),중조표체재체.전화대장간균BL21,이병기-β-D-류대필남반유당감(IPTG)유도단백표체,얼주친합층석순화단백.중조신호결합단백(RBP-J)보고기인실험급Notch하유분자Her1검측증실hDlll(DSL)활성.자주분선제대혈CD34+세포,가입hdll1(DSL)혹연합간세포인자(SCF),FIt3배체(FL)、혈소판생성표(TPO)부육1주,관찰체외확증작용.결과:성공극륭hDlll(DSL),병구건료pET32a(+)- hDll1(DSL)중조표체재체.재대장간균BL21성공표체Trx- hDll1(DSL)융합단백,경얼주친합층석순화단백,성공획득고순도적Trx-hDll1(DSL)융합단백.배체활성실험현시,가용성적Trx-hdll1(DSL)단백가이격활RBP-J보고묘인,병차능상조Notch하유분자Hes1적표체,증명기능구격활Notch신호통로.차외,Trx-hDll1(DSL)융합단백여SCF、FL급TPO련용,구유협동자격CD34+세포체외확증적작용.결론:성공구건료pET32a(+)-hDll1(DSL)중조표체재체,표체、순화료구유생물학활성적Trx-hDill1(DSL)융합단백,구유협동자격CD34+세포체외확증적작용,위조혈우/조세포체외확증체계적우화연구전정료기출.