南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
4期
502-506
,共5页
董金凯%罗津%阎瑾琦%张亮%高江平%于继云
董金凱%囉津%閻瑾琦%張亮%高江平%于繼雲
동금개%라진%염근기%장량%고강평%우계운
前列腺干细胞抗原%原核表达%蛋白纯化%前列腺癌
前列腺榦細胞抗原%原覈錶達%蛋白純化%前列腺癌
전렬선간세포항원%원핵표체%단백순화%전렬선암
目的 RT-PCR扩增小鼠前列腺干细胞抗原(mPSCA)基因,构建原核表达质粒pET-42a-mPSCA,诱导mPSCA蛋白表达并纯化,并检测mPSCA蛋白的抗原活性.方法 利用RT-PCR的方法从小鼠前列腺癌细胞系RM-1细胞中扩增mPSCA基因,测序正确后PCR的方法去掉mPSCA的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-mPSCA.将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化.经SDS-PAGE分析后,Western blot检测纯化的蛋白,将纯化蛋白进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价.结果 测序结果证实成功扩增出全长mPSCA基因；酶切和测序结果证实pET-42a-mPSCA原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白；Western blot检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应；ELISA检测显示纯化后的mPSCA抗原具有免疫原性.结论 成功扩增出小鼠全长PSCA基因,成功构建了mPSCA基因的原核表达载体,获得了纯化的mPSCA蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以PSCA为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础.
目的 RT-PCR擴增小鼠前列腺榦細胞抗原(mPSCA)基因,構建原覈錶達質粒pET-42a-mPSCA,誘導mPSCA蛋白錶達併純化,併檢測mPSCA蛋白的抗原活性.方法 利用RT-PCR的方法從小鼠前列腺癌細胞繫RM-1細胞中擴增mPSCA基因,測序正確後PCR的方法去掉mPSCA的信號肽序列將其剋隆至原覈錶達載體pET-42a中構建重組載體pET-42a-mPSCA.將其轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,隨後將錶達的融閤蛋白進行純化.經SDS-PAGE分析後,Western blot檢測純化的蛋白,將純化蛋白進一步包闆後用ELISA法對其抗原活性進行評價.結果 測序結果證實成功擴增齣全長mPSCA基因；酶切和測序結果證實pET-42a-mPSCA原覈錶達載體構建成功；轉化後可以成功誘導併純化齣大小與預期一緻的蛋白；Western blot檢測證實純化的蛋白能與特異性的抗體髮生反應；ELISA檢測顯示純化後的mPSCA抗原具有免疫原性.結論 成功擴增齣小鼠全長PSCA基因,成功構建瞭mPSCA基因的原覈錶達載體,穫得瞭純化的mPSCA蛋白,該蛋白具有良好的抗原活性,為進一步研究以PSCA為靶點的前列腺癌的免疫治療奠定瞭基礎.
목적 RT-PCR확증소서전렬선간세포항원(mPSCA)기인,구건원핵표체질립pET-42a-mPSCA,유도mPSCA단백표체병순화,병검측mPSCA단백적항원활성.방법 이용RT-PCR적방법종소서전렬선암세포계RM-1세포중확증mPSCA기인,측서정학후PCR적방법거도mPSCA적신호태서렬장기극륭지원핵표체재체pET-42a중구건중조재체pET-42a-mPSCA.장기전화지대장간균BL21(DE3)중유도표체,수후장표체적융합단백진행순화.경SDS-PAGE분석후,Western blot검측순화적단백,장순화단백진일보포판후용ELISA법대기항원활성진행평개.결과 측서결과증실성공확증출전장mPSCA기인；매절화측서결과증실pET-42a-mPSCA원핵표체재체구건성공；전화후가이성공유도병순화출대소여예기일치적단백；Western blot검측증실순화적단백능여특이성적항체발생반응；ELISA검측현시순화후적mPSCA항원구유면역원성.결론 성공확증출소서전장PSCA기인,성공구건료mPSCA기인적원핵표체재체,획득료순화적mPSCA단백,해단백구유량호적항원활성,위진일보연구이PSCA위파점적전렬선암적면역치료전정료기출.
