中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2012年
7期
669-674
,共6页
阮溦%李锁北%徐军美%肖锋%谭嵘
阮溦%李鎖北%徐軍美%肖鋒%譚嶸
원미%리쇄북%서군미%초봉%담영
肿瘤坏死因子-α%内皮细胞%凋亡%MST1%caspase-3
腫瘤壞死因子-α%內皮細胞%凋亡%MST1%caspase-3
종류배사인자-α%내피세포%조망%MST1%caspase-3
目的:探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)凋亡的影响及作用机制.方法:用不同浓度的TNF-α(0～100 ng/mL)诱导内皮细胞凋亡,24 h后通过TUNEL法观察内皮细胞凋亡率,Western印迹分析TNF-α对MST1活性的影响；随后将构建的MST1小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染原代HUVEC,转染后24 h加入TNF-α(10 ng/mL)诱导HUVEC凋亡,24 h后通过Western印迹确定MST1 siRNA的基因沉默效率；通过TUNEL法观察MST1基因的敲除对TNF-α介导的内皮细胞凋亡的影响；并进一步用Western印迹观察MST1基因敲除对caspase-3活性的影响.结果:TNF-α(10,40,100 ng/mL)能导致内皮细胞凋亡显著增多(P＜0.001),并且呈剂量依赖性；随着TNF-α浓度增加,MST1的活化增多,MST1激酶活性相应增加；MST1 siRNA对内皮细胞中MST1基因表达的抑制呈剂量依赖性,100 nmol/L MST1 siRNA能特异性沉默内皮细胞中MST1基因的表达(P＜0.05)；MST1 siRNA能明显减少TNF-α诱导的内皮细胞凋亡(P＜0.05),抑制TNF-α诱导的MST1裂解活化,同时caspase-3的活性也相应减少.结论:MST1 siRNA通过抑制caspase-3的级联放大效应减少TNF-α诱导的HUVEC凋亡.
目的:探討絲/囌氨痠蛋白激酶(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)對腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)誘導的人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)凋亡的影響及作用機製.方法:用不同濃度的TNF-α(0～100 ng/mL)誘導內皮細胞凋亡,24 h後通過TUNEL法觀察內皮細胞凋亡率,Western印跡分析TNF-α對MST1活性的影響；隨後將構建的MST1小榦擾RNA(small interference RNA,siRNA)在脂質體Lipofectamine 2000的介導下轉染原代HUVEC,轉染後24 h加入TNF-α(10 ng/mL)誘導HUVEC凋亡,24 h後通過Western印跡確定MST1 siRNA的基因沉默效率；通過TUNEL法觀察MST1基因的敲除對TNF-α介導的內皮細胞凋亡的影響；併進一步用Western印跡觀察MST1基因敲除對caspase-3活性的影響.結果:TNF-α(10,40,100 ng/mL)能導緻內皮細胞凋亡顯著增多(P＜0.001),併且呈劑量依賴性；隨著TNF-α濃度增加,MST1的活化增多,MST1激酶活性相應增加；MST1 siRNA對內皮細胞中MST1基因錶達的抑製呈劑量依賴性,100 nmol/L MST1 siRNA能特異性沉默內皮細胞中MST1基因的錶達(P＜0.05)；MST1 siRNA能明顯減少TNF-α誘導的內皮細胞凋亡(P＜0.05),抑製TNF-α誘導的MST1裂解活化,同時caspase-3的活性也相應減少.結論:MST1 siRNA通過抑製caspase-3的級聯放大效應減少TNF-α誘導的HUVEC凋亡.
목적:탐토사/소안산단백격매(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)대종류배사인자-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)유도적인제정맥내피세포(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)조망적영향급작용궤제.방법:용불동농도적TNF-α(0～100 ng/mL)유도내피세포조망,24 h후통과TUNEL법관찰내피세포조망솔,Western인적분석TNF-α대MST1활성적영향；수후장구건적MST1소간우RNA(small interference RNA,siRNA)재지질체Lipofectamine 2000적개도하전염원대HUVEC,전염후24 h가입TNF-α(10 ng/mL)유도HUVEC조망,24 h후통과Western인적학정MST1 siRNA적기인침묵효솔；통과TUNEL법관찰MST1기인적고제대TNF-α개도적내피세포조망적영향；병진일보용Western인적관찰MST1기인고제대caspase-3활성적영향.결과:TNF-α(10,40,100 ng/mL)능도치내피세포조망현저증다(P＜0.001),병차정제량의뢰성；수착TNF-α농도증가,MST1적활화증다,MST1격매활성상응증가；MST1 siRNA대내피세포중MST1기인표체적억제정제량의뢰성,100 nmol/L MST1 siRNA능특이성침묵내피세포중MST1기인적표체(P＜0.05)；MST1 siRNA능명현감소TNF-α유도적내피세포조망(P＜0.05),억제TNF-α유도적MST1렬해활화,동시caspase-3적활성야상응감소.결론:MST1 siRNA통과억제caspase-3적급련방대효응감소TNF-α유도적HUVEC조망.
