病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2005年
4期
253-258
,共6页
徐丽宏%梁国栋%付士红%曹玉玺%关坤萍%夏国良%吴士俊%张智清
徐麗宏%樑國棟%付士紅%曹玉璽%關坤萍%夏國良%吳士俊%張智清
서려굉%량국동%부사홍%조옥새%관곤평%하국량%오사준%장지청
Pichia pastoris 酵母表达系统%乙肝表面抗原,G145R 突变%免疫学特性
Pichia pastoris 酵母錶達繫統%乙肝錶麵抗原,G145R 突變%免疫學特性
Pichia pastoris 효모표체계통%을간표면항원,G145R 돌변%면역학특성
为了研究乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)发生G145R突变后的免疫学特性改变情况,首先利用Pichiapastoris酵母表达系统分泌表达G145R突变后的HBsAg的preS2+S(中蛋白),用重组表达产物免疫小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot实验等研究其抗原性和免疫原性与野毒型HBsAg的异同.从150个阳性表达克隆中筛选出一株表达量最高的克隆株MC23,Western blot检测显示,表达的HBsAg中蛋白单体主带分子量在34kD、37kD左右,表达量约为200μg/L.用不同的HBsAg检测试剂检测其抗原性发现,G145R突变后的HBsAg,用绝大多数试剂都不能很好地检出,检出能力只有野毒型HBsAg的50%或更低,但用美国雅培公司的试剂检出能力可达野毒的98%.G145R突变后的HBsAg中蛋白免疫小鼠后,血清中可检测到1:1 600的特异性表面抗体,该抗体与G145R突变后的HBsAg"a"决定簇合成肽P2-145R也能发生交叉反应,反应滴度为1:80.但该抗体和野毒型HBsAg蛋白以及野毒"a"决定簇合成肽P1-wt均不反应.上述结果表明,G145R突变后的HBsAg中蛋白在Pichia pastoris酵母系统得到了分泌表达,表达产物仍具有较好的免疫原性,但和野毒HBsAg相比,其抗原性和免疫原性发生了明显改变.
為瞭研究乙型肝炎(乙肝)病毒錶麵抗原(HBsAg)髮生G145R突變後的免疫學特性改變情況,首先利用Pichiapastoris酵母錶達繫統分泌錶達G145R突變後的HBsAg的preS2+S(中蛋白),用重組錶達產物免疫小鼠,酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和Western blot實驗等研究其抗原性和免疫原性與野毒型HBsAg的異同.從150箇暘性錶達剋隆中篩選齣一株錶達量最高的剋隆株MC23,Western blot檢測顯示,錶達的HBsAg中蛋白單體主帶分子量在34kD、37kD左右,錶達量約為200μg/L.用不同的HBsAg檢測試劑檢測其抗原性髮現,G145R突變後的HBsAg,用絕大多數試劑都不能很好地檢齣,檢齣能力隻有野毒型HBsAg的50%或更低,但用美國雅培公司的試劑檢齣能力可達野毒的98%.G145R突變後的HBsAg中蛋白免疫小鼠後,血清中可檢測到1:1 600的特異性錶麵抗體,該抗體與G145R突變後的HBsAg"a"決定簇閤成肽P2-145R也能髮生交扠反應,反應滴度為1:80.但該抗體和野毒型HBsAg蛋白以及野毒"a"決定簇閤成肽P1-wt均不反應.上述結果錶明,G145R突變後的HBsAg中蛋白在Pichia pastoris酵母繫統得到瞭分泌錶達,錶達產物仍具有較好的免疫原性,但和野毒HBsAg相比,其抗原性和免疫原性髮生瞭明顯改變.
위료연구을형간염(을간)병독표면항원(HBsAg)발생G145R돌변후적면역학특성개변정황,수선이용Pichiapastoris효모표체계통분비표체G145R돌변후적HBsAg적preS2+S(중단백),용중조표체산물면역소서,매련면역흡부시험(ELISA)화Western blot실험등연구기항원성화면역원성여야독형HBsAg적이동.종150개양성표체극륭중사선출일주표체량최고적극륭주MC23,Western blot검측현시,표체적HBsAg중단백단체주대분자량재34kD、37kD좌우,표체량약위200μg/L.용불동적HBsAg검측시제검측기항원성발현,G145R돌변후적HBsAg,용절대다수시제도불능흔호지검출,검출능력지유야독형HBsAg적50%혹경저,단용미국아배공사적시제검출능력가체야독적98%.G145R돌변후적HBsAg중단백면역소서후,혈청중가검측도1:1 600적특이성표면항체,해항체여G145R돌변후적HBsAg"a"결정족합성태P2-145R야능발생교차반응,반응적도위1:80.단해항체화야독형HBsAg단백이급야독"a"결정족합성태P1-wt균불반응.상술결과표명,G145R돌변후적HBsAg중단백재Pichia pastoris효모계통득도료분비표체,표체산물잉구유교호적면역원성,단화야독HBsAg상비,기항원성화면역원성발생료명현개변.
