CAJ | 학술논문

目的:评估以U 6启动子作为启动序列(pSilencer2.0-U6)载体介导的小RNA干扰片段在培养细胞株中抑制HBV复制的效应.方法:将针对HBV基因组不同区域(S,X及C区)的核苷酸序列插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒(分别为pS,pX及pC)载体转染入HepG2-N10细胞株(可稳定表达HBsAg、HBeAg及adw2亚型Dane颗粒)中.以ELISA法检测病毒抗原,以逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测病毒mRNA,并以荧光定量PCR法检测分泌入培养基的共价闭合环状DNA(covalent closed circular DNA,cccDNA).结果:质粒载体介导的RNA干扰能明显抑制培养基中HBsAg及HBeAg的表达.并且RT-PCR法检测显示病毒mRNA也被降解了,从而减少了蛋白表达及病毒逆转录复制的模板.荧光定量PCR法检测显示分泌入培养基的cccDNAs明显下降(HBV DNA log10:pS:4.00±0.13;pC:4.08±0.10;pX:4.28±0.06;pN:5.05±0.07;HepG2-N10:4.74±0.06;HepG2:＜2.70).结论:RNA干扰能抑制HBV基因表达及病毒复制,并且RNA干扰可能为HBV的治疗带来巨大的变化.
목적:평고이U 6계동자작위계동서렬(pSilencer2.0-U6)재체개도적소RNA간우편단재배양세포주중억제HBV복제적효응.방법:장침대HBV기인조불동구역(S,X급C구)적핵감산서렬삽입지pSilencer재체중,병장중조후적pSilencer질립(분별위pS,pX급pC)재체전염입HepG2-N10세포주(가은정표체HBsAg、HBeAg급adw2아형Dane과립)중.이ELISA법검측병독항원,이역전록-취합매련반응법(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)검측병독mRNA,병이형광정량PCR법검측분비입배양기적공개폐합배상DNA(covalent closed circular DNA,cccDNA).결과:질립재체개도적RNA간우능명현억제배양기중HBsAg급HBeAg적표체.병차RT-PCR법검측현시병독mRNA야피강해료,종이감소료단백표체급병독역전록복제적모판.형광정량PCR법검측현시분비입배양기적cccDNAs명현하강(HBV DNA log10:pS:4.00±0.13;pC:4.08±0.10;pX:4.28±0.06;pN:5.05±0.07;HepG2-N10:4.74±0.06;HepG2:＜2.70).결론:RNA간우능억제HBV기인표체급병독복제,병차RNA간우가능위HBV적치료대래거대적변화.