现代生物医学进展
現代生物醫學進展
현대생물의학진전
PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE
2008年
4期
653-655,666
,共4页
位全芳%杨劲%曾益军%周虎传%李劲%刘洋%李杰
位全芳%楊勁%曾益軍%週虎傳%李勁%劉洋%李傑
위전방%양경%증익군%주호전%리경%류양%리걸
增殖细胞核抗原%突变体%稳定转染%Hela细胞
增殖細胞覈抗原%突變體%穩定轉染%Hela細胞
증식세포핵항원%돌변체%은정전염%Hela세포
目的:构建重组人PCNA突变体(mutant PCNA,mPCNA)的真核表达质粒,并建立稳定高表达该目的蛋白的宫颈癌细胞系Hela.为进一步研究PCNA在DNA损伤修复中重要的生物学功能奠定基础.方法:将舍有定点突变的PCNA cDNA序列克隆到T载体中,然后再亚克隆到真核表达栽体pCDNA3.1/V5-His A上,构建真核表达载体质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA,稳定转染到Hela细胞中;Western Blotting法检测蛋白的表达情况;白细胞记数法测定细胞的生长速率.结果:真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA经酶切、测序分析与实验设计的序列完全一致;稳定建系后,Western Blotting结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;稳定高表达mPCNA的细胞系与野生型细胞相比两者的生长速率基本一致.结论:成功构建了真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA;建立了稳定高表达该突变体的Hela细胞系;PCNA突变体的高表达不影响Hela细胞的正常生长.
目的:構建重組人PCNA突變體(mutant PCNA,mPCNA)的真覈錶達質粒,併建立穩定高錶達該目的蛋白的宮頸癌細胞繫Hela.為進一步研究PCNA在DNA損傷脩複中重要的生物學功能奠定基礎.方法:將捨有定點突變的PCNA cDNA序列剋隆到T載體中,然後再亞剋隆到真覈錶達栽體pCDNA3.1/V5-His A上,構建真覈錶達載體質粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA,穩定轉染到Hela細胞中;Western Blotting法檢測蛋白的錶達情況;白細胞記數法測定細胞的生長速率.結果:真覈錶達質粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA經酶切、測序分析與實驗設計的序列完全一緻;穩定建繫後,Western Blotting結果顯示在相應位置可見清楚的目的條帶;穩定高錶達mPCNA的細胞繫與野生型細胞相比兩者的生長速率基本一緻.結論:成功構建瞭真覈錶達質粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA;建立瞭穩定高錶達該突變體的Hela細胞繫;PCNA突變體的高錶達不影響Hela細胞的正常生長.
목적:구건중조인PCNA돌변체(mutant PCNA,mPCNA)적진핵표체질립,병건립은정고표체해목적단백적궁경암세포계Hela.위진일보연구PCNA재DNA손상수복중중요적생물학공능전정기출.방법:장사유정점돌변적PCNA cDNA서렬극륭도T재체중,연후재아극륭도진핵표체재체pCDNA3.1/V5-His A상,구건진핵표체재체질립pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA,은정전염도Hela세포중;Western Blotting법검측단백적표체정황;백세포기수법측정세포적생장속솔.결과:진핵표체질립pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA경매절、측서분석여실험설계적서렬완전일치;은정건계후,Western Blotting결과현시재상응위치가견청초적목적조대;은정고표체mPCNA적세포계여야생형세포상비량자적생장속솔기본일치.결론:성공구건료진핵표체질립pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA;건립료은정고표체해돌변체적Hela세포계;PCNA돌변체적고표체불영향Hela세포적정상생장.
