山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
46期
16-18
,共3页
刘承武%姚琦%袁利华%牛茂昌%刘靖华%杨敏%冯国开%姜勇
劉承武%姚琦%袁利華%牛茂昌%劉靖華%楊敏%馮國開%薑勇
류승무%요기%원리화%우무창%류정화%양민%풍국개%강용
噬菌体展示技术%DNA噬菌体%聚合酶链反应%淘选
噬菌體展示技術%DNA噬菌體%聚閤酶鏈反應%淘選
서균체전시기술%DNA서균체%취합매련반응%도선
目的 优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法,提高筛选效率.方法 通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定,并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较.结果 PCR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别为92.73%、93.75%,差异无统计学意义(P>0.05);两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测序结果一致;第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PCR扩增和电泳鉴定,发现无插入目的片段的噬菌体克隆检出率逐轮增加分别为1.04%、4.17%和22.69%(P<0.01).结论 PCR扩增含插入目的片段噬菌体DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用,值得推广.
目的 優化大規模噬菌體DNA測序樣品製備的方法,提高篩選效率.方法 通過PCR擴增噬菌體環七肽庫第一輪、第二輪和第三輪淘選產物中含插入目的片段噬菌體DNA,經瓊脂糖凝膠電泳和DNA測序鑒定,併與經典的噬菌體DNA提取方法進行比較.結果 PCR擴增法和經典法製備的噬菌體DNA的測序成功率分彆為92.73%、93.75%,差異無統計學意義(P>0.05);兩種方法製備的同一箇噬菌體剋隆的DNA經測序鑒定顯示測序結果一緻;第一輪、第二輪和第三輪淘選產物的噬菌體剋隆經PCR擴增和電泳鑒定,髮現無插入目的片段的噬菌體剋隆檢齣率逐輪增加分彆為1.04%、4.17%和22.69%(P<0.01).結論 PCR擴增含插入目的片段噬菌體DNA的方法可使大規模噬菌體篩選和DNA測序更加方便、快捷、實用,值得推廣.
목적 우화대규모서균체DNA측서양품제비적방법,제고사선효솔.방법 통과PCR확증서균체배칠태고제일륜、제이륜화제삼륜도선산물중함삽입목적편단서균체DNA,경경지당응효전영화DNA측서감정,병여경전적서균체DNA제취방법진행비교.결과 PCR확증법화경전법제비적서균체DNA적측서성공솔분별위92.73%、93.75%,차이무통계학의의(P>0.05);량충방법제비적동일개서균체극륭적DNA경측서감정현시측서결과일치;제일륜、제이륜화제삼륜도선산물적서균체극륭경PCR확증화전영감정,발현무삽입목적편단적서균체극륭검출솔축륜증가분별위1.04%、4.17%화22.69%(P<0.01).결론 PCR확증함삽입목적편단서균체DNA적방법가사대규모서균체사선화DNA측서경가방편、쾌첩、실용,치득추엄.
