生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2009年
10期
178-180,193
,共4页
邵强%冯真真%张勇朝%潘若文%徐玉国
邵彊%馮真真%張勇朝%潘若文%徐玉國
소강%풍진진%장용조%반약문%서옥국
荧光定量PCR%HBsAg基因%Mox基因%重组汉逊酵母%拷贝数
熒光定量PCR%HBsAg基因%Mox基因%重組漢遜酵母%拷貝數
형광정량PCR%HBsAg기인%Mox기인%중조한손효모%고패수
重组汉逊酵母基因中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和检测传代稳定性的重要因素,因此外源基因拷贝数的检测成为研究和分析重组基因的重要内容.利用快速、灵敏的荧光定量PCR法检测外源基因HBsAg拷贝数,以Mox基因为内源参照基因,通过梯度稀释法,建立了Mox基因和HBsAg基因的循环数(Ct值)与起始模板数的相关标准曲线,其相关系数分别达到0.9996和0.9982.通过比较目的基因HBsAg和内源参照基因Mox在同一荧光强度下出峰的循环数,获得了目的基因HBsAg在重组汉逊酵母中的拷贝数为39.发酵前后HBsAg基因在重组汉逊酵母中稳定存在,发酵前后拷贝数相差均小于6.2%.本方法快速、简便、准确,可以满足基因拷贝数检测的需要.
重組漢遜酵母基因中外源基因拷貝數是影響目的基因錶達水平和檢測傳代穩定性的重要因素,因此外源基因拷貝數的檢測成為研究和分析重組基因的重要內容.利用快速、靈敏的熒光定量PCR法檢測外源基因HBsAg拷貝數,以Mox基因為內源參照基因,通過梯度稀釋法,建立瞭Mox基因和HBsAg基因的循環數(Ct值)與起始模闆數的相關標準麯線,其相關繫數分彆達到0.9996和0.9982.通過比較目的基因HBsAg和內源參照基因Mox在同一熒光彊度下齣峰的循環數,穫得瞭目的基因HBsAg在重組漢遜酵母中的拷貝數為39.髮酵前後HBsAg基因在重組漢遜酵母中穩定存在,髮酵前後拷貝數相差均小于6.2%.本方法快速、簡便、準確,可以滿足基因拷貝數檢測的需要.
중조한손효모기인중외원기인고패수시영향목적기인표체수평화검측전대은정성적중요인소,인차외원기인고패수적검측성위연구화분석중조기인적중요내용.이용쾌속、령민적형광정량PCR법검측외원기인HBsAg고패수,이Mox기인위내원삼조기인,통과제도희석법,건립료Mox기인화HBsAg기인적순배수(Ct치)여기시모판수적상관표준곡선,기상관계수분별체도0.9996화0.9982.통과비교목적기인HBsAg화내원삼조기인Mox재동일형광강도하출봉적순배수,획득료목적기인HBsAg재중조한손효모중적고패수위39.발효전후HBsAg기인재중조한손효모중은정존재,발효전후고패수상차균소우6.2%.본방법쾌속、간편、준학,가이만족기인고패수검측적수요.
