安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
16期
8462-8465,8483
,共5页
牛瑟氏泰勒虫%重组P23表面蛋白%大肠杆菌%表达条件
牛瑟氏泰勒蟲%重組P23錶麵蛋白%大腸桿菌%錶達條件
우슬씨태륵충%중조P23표면단백%대장간균%표체조건
[目的]研究牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆及原核表达.[方法]采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫中国延边株P23基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-P23,经PCR、双酶切鉴定后测序;将目的基因片段亚克隆入表达载体pGEX-4T-1构建重组表达质粒pGEX-4T-P23,转化宿主菌BL21获得重组菌.通过对诱导条件的优化,根据SDS-PAGE确定表达蛋白的最佳表达条件;Western-blotting检测表达蛋白的反应原性.[结果]所克隆的牛瑟氏泰勒虫P23基因片段长507 bp,与牛瑟氏泰勒虫日本株P23基因的核苷酸同源性达99.4%,表达的融合蛋白大小约为46 ku;诱导时机以接种培养后2 h为最佳,诱导时间以6 h为最佳,诱导温度以34 ℃为最佳,0.008～1 000 mmol/L的IPTG对表达量的影响不大.Western blotting检测表明该蛋白具有较好的抗原性.[结论]为牛瑟氏泰勒虫病的免疫学诊断和预防等研究奠定了基础.
[目的]研究牛瑟氏泰勒蟲P23錶麵蛋白基因的剋隆及原覈錶達.[方法]採用PCR方法擴增牛瑟氏泰勒蟲中國延邊株P23基因片段,將擴增產物剋隆入pMD18-T載體構建重組質粒pMD18-P23,經PCR、雙酶切鑒定後測序;將目的基因片段亞剋隆入錶達載體pGEX-4T-1構建重組錶達質粒pGEX-4T-P23,轉化宿主菌BL21穫得重組菌.通過對誘導條件的優化,根據SDS-PAGE確定錶達蛋白的最佳錶達條件;Western-blotting檢測錶達蛋白的反應原性.[結果]所剋隆的牛瑟氏泰勒蟲P23基因片段長507 bp,與牛瑟氏泰勒蟲日本株P23基因的覈苷痠同源性達99.4%,錶達的融閤蛋白大小約為46 ku;誘導時機以接種培養後2 h為最佳,誘導時間以6 h為最佳,誘導溫度以34 ℃為最佳,0.008～1 000 mmol/L的IPTG對錶達量的影響不大.Western blotting檢測錶明該蛋白具有較好的抗原性.[結論]為牛瑟氏泰勒蟲病的免疫學診斷和預防等研究奠定瞭基礎.
[목적]연구우슬씨태륵충P23표면단백기인적극륭급원핵표체.[방법]채용PCR방법확증우슬씨태륵충중국연변주P23기인편단,장확증산물극륭입pMD18-T재체구건중조질립pMD18-P23,경PCR、쌍매절감정후측서;장목적기인편단아극륭입표체재체pGEX-4T-1구건중조표체질립pGEX-4T-P23,전화숙주균BL21획득중조균.통과대유도조건적우화,근거SDS-PAGE학정표체단백적최가표체조건;Western-blotting검측표체단백적반응원성.[결과]소극륭적우슬씨태륵충P23기인편단장507 bp,여우슬씨태륵충일본주P23기인적핵감산동원성체99.4%,표체적융합단백대소약위46 ku;유도시궤이접충배양후2 h위최가,유도시간이6 h위최가,유도온도이34 ℃위최가,0.008～1 000 mmol/L적IPTG대표체량적영향불대.Western blotting검측표명해단백구유교호적항원성.[결론]위우슬씨태륵충병적면역학진단화예방등연구전정료기출.
