中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2011年
2期
126-130
,共5页
肝移植%乙型病毒性肝炎%吲哚胺2,3-二氧化酶%免疫%腺病毒
肝移植%乙型病毒性肝炎%吲哚胺2,3-二氧化酶%免疫%腺病毒
간이식%을형병독성간염%신타알2,3-이양화매%면역%선병독
目的 观察双目的基因吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)和乙型肝炎病毒前S抗原(HBV preS)在肝癌细胞株HepG2细胞的表达及其对人外周血淋巴细胞(PBLC)的抑制作用.方法 将前期制备的重组腺病毒Ad-IDOEGFP-preS转染HepG2细胞,用倒置荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,RT-PCR检测目的基因IDO和HBV preSmRNA的表达;与人PBLC共培养,同位素标记法观察IDO对其增殖的抑制作用.结果 HepG2细胞在转染3 d后即可见明显的EGFP表达,7 d后荧光更强,提示目的基因已成功导入HepG2细胞.RT-PCR显示感染Ad-IDOEGFP-preS重组腺病毒的HepG2细胞中含有IDO和HBV preS基因片段.IDO相对表达强度为1.27,HBV preS相对表达强度为1.18,而对照组HepG2细胞未出现IDO和HBV preS基因片段.与其共培养的淋巴细胞每分钟放射线计数(CPM)为(7 471±1 375)次/min,明显低于对照组CPM[(13 821±1 997)次/min],P<0.001.结论 重组腺病毒Ad-IDOEGFP-preS能有效地将目的基因IDO和HBV preS导入HepG2细胞并表达,携带该基因的HepG2细胞对PBLC的增殖具有明显的抑制作用,这将为进一步的肝移植乙肝主动免疫动物实验奠定基础.
目的 觀察雙目的基因吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)和乙型肝炎病毒前S抗原(HBV preS)在肝癌細胞株HepG2細胞的錶達及其對人外週血淋巴細胞(PBLC)的抑製作用.方法 將前期製備的重組腺病毒Ad-IDOEGFP-preS轉染HepG2細胞,用倒置熒光顯微鏡觀察增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的錶達,RT-PCR檢測目的基因IDO和HBV preSmRNA的錶達;與人PBLC共培養,同位素標記法觀察IDO對其增殖的抑製作用.結果 HepG2細胞在轉染3 d後即可見明顯的EGFP錶達,7 d後熒光更彊,提示目的基因已成功導入HepG2細胞.RT-PCR顯示感染Ad-IDOEGFP-preS重組腺病毒的HepG2細胞中含有IDO和HBV preS基因片段.IDO相對錶達彊度為1.27,HBV preS相對錶達彊度為1.18,而對照組HepG2細胞未齣現IDO和HBV preS基因片段.與其共培養的淋巴細胞每分鐘放射線計數(CPM)為(7 471±1 375)次/min,明顯低于對照組CPM[(13 821±1 997)次/min],P<0.001.結論 重組腺病毒Ad-IDOEGFP-preS能有效地將目的基因IDO和HBV preS導入HepG2細胞併錶達,攜帶該基因的HepG2細胞對PBLC的增殖具有明顯的抑製作用,這將為進一步的肝移植乙肝主動免疫動物實驗奠定基礎.
목적 관찰쌍목적기인신타알2,3-이양화매(IDO)화을형간염병독전S항원(HBV preS)재간암세포주HepG2세포적표체급기대인외주혈림파세포(PBLC)적억제작용.방법 장전기제비적중조선병독Ad-IDOEGFP-preS전염HepG2세포,용도치형광현미경관찰증강형록색형광단백(EGFP)적표체,RT-PCR검측목적기인IDO화HBV preSmRNA적표체;여인PBLC공배양,동위소표기법관찰IDO대기증식적억제작용.결과 HepG2세포재전염3 d후즉가견명현적EGFP표체,7 d후형광경강,제시목적기인이성공도입HepG2세포.RT-PCR현시감염Ad-IDOEGFP-preS중조선병독적HepG2세포중함유IDO화HBV preS기인편단.IDO상대표체강도위1.27,HBV preS상대표체강도위1.18,이대조조HepG2세포미출현IDO화HBV preS기인편단.여기공배양적림파세포매분종방사선계수(CPM)위(7 471±1 375)차/min,명현저우대조조CPM[(13 821±1 997)차/min],P<0.001.결론 중조선병독Ad-IDOEGFP-preS능유효지장목적기인IDO화HBV preS도입HepG2세포병표체,휴대해기인적HepG2세포대PBLC적증식구유명현적억제작용,저장위진일보적간이식을간주동면역동물실험전정기출.
