CAJ | 학술논문

从不结球白菜Pol_CMS胞质不育系SSH差减文库中得到1条热激蛋白基因的EST序列，通过对该基因的NCBI网上BLAST比对发现，与热激蛋白的同源性最高，与拟南芥HSP81-4(AT5G56000)同源性高达96％，命名为BcHSP81-4。将BcHSP81-4基因片段连接到原核表达载体PGEX-4T-3，转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白的表达。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳，产生了预期大小的重组蛋白，进一步证明了该基因属于热激蛋白90家族。并采用生物信息学方法，利用多种在线软件对不结球白菜热激蛋白BcHSP81-4的理化性质、亲水性、跨膜区、亚细胞定位及蛋白质结构进行预测和分析。理化性质分析结果显示，该蛋白质含699个氨基酸，分子量为80 050，理论等电点pI值为4.95。TMpred跨膜分析结果显示，它含有1个显著的跨膜螺旋区，这个区域与ProtScale预测的疏水区基本对应。用TargetP server和WOLFPSORT server程序预测该蛋白质为细胞质蛋白质，二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主。
종불결구백채Pol_CMS포질불육계SSH차감문고중득도1조열격단백기인적EST서렬，통과대해기인적NCBI망상BLAST비대발현，여열격단백적동원성최고，여의남개HSP81-4(AT5G56000)동원성고체96％，명명위BcHSP81-4。장BcHSP81-4기인편단련접도원핵표체재체PGEX-4T-3，전화대장간균BL21(DE3)후유도중조단백적표체。경IPTG유도후진행SDS-PAGE전영，산생료예기대소적중조단백，진일보증명료해기인속우열격단백90가족。병채용생물신식학방법，이용다충재선연건대불결구백채열격단백BcHSP81-4적이화성질、친수성、과막구、아세포정위급단백질결구진행예측화분석。이화성질분석결과현시，해단백질함699개안기산，분자량위80 050，이론등전점pI치위4.95。TMpred과막분석결과현시，타함유1개현저적과막라선구，저개구역여ProtScale예측적소수구기본대응。용TargetP server화WOLFPSORT server정서예측해단백질위세포질단백질，이급결구이α-라선화수궤권곡위주。