上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2011年
8期
1078-1081
,共4页
赵莼%王方%计菁%施沃栋%范先群%罗敏
趙莼%王方%計菁%施沃棟%範先群%囉敏
조순%왕방%계정%시옥동%범선군%라민
腺相关病毒%色素上皮衍生因子%虹膜色素上皮细胞%转染
腺相關病毒%色素上皮衍生因子%虹膜色素上皮細胞%轉染
선상관병독%색소상피연생인자%홍막색소상피세포%전염
目的 探讨以腺相关病毒(AAV)为载体,对体外培养的人虹膜色素上皮(IPE)细胞进行色素上皮衍生因子(PEDF)转染,获得高效表达PEDF转基因细胞的可行性.方法 构建携带PEDF基因的重组AAV载体AAV-PEDF,体外培养人IPE,用1 × 106 pfu的AAV-PEDF按感染复数(MOI)为0、2、10和20分别感染体外培养的IPE细胞；荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况；流式细胞术检测细胞转染效率；RT-PCR和Western blotting法鉴定PEDF在IPE细胞中的表达.结果 AAV-PEDF转染后,IPE细胞生长正常,用荧光显微镜、RT-PCR和Western blotting均检测到PEDF表达.在MOI为20时,细胞感染阳性率达64.22％.结论 AAV-PEDF能有效地转染体外培养的IPE细胞并有效表达PEDF.
目的 探討以腺相關病毒(AAV)為載體,對體外培養的人虹膜色素上皮(IPE)細胞進行色素上皮衍生因子(PEDF)轉染,穫得高效錶達PEDF轉基因細胞的可行性.方法 構建攜帶PEDF基因的重組AAV載體AAV-PEDF,體外培養人IPE,用1 × 106 pfu的AAV-PEDF按感染複數(MOI)為0、2、10和20分彆感染體外培養的IPE細胞；熒光顯微鏡下觀察細胞綠色熒光蛋白錶達情況；流式細胞術檢測細胞轉染效率；RT-PCR和Western blotting法鑒定PEDF在IPE細胞中的錶達.結果 AAV-PEDF轉染後,IPE細胞生長正常,用熒光顯微鏡、RT-PCR和Western blotting均檢測到PEDF錶達.在MOI為20時,細胞感染暘性率達64.22％.結論 AAV-PEDF能有效地轉染體外培養的IPE細胞併有效錶達PEDF.
목적 탐토이선상관병독(AAV)위재체,대체외배양적인홍막색소상피(IPE)세포진행색소상피연생인자(PEDF)전염,획득고효표체PEDF전기인세포적가행성.방법 구건휴대PEDF기인적중조AAV재체AAV-PEDF,체외배양인IPE,용1 × 106 pfu적AAV-PEDF안감염복수(MOI)위0、2、10화20분별감염체외배양적IPE세포；형광현미경하관찰세포록색형광단백표체정황；류식세포술검측세포전염효솔；RT-PCR화Western blotting법감정PEDF재IPE세포중적표체.결과 AAV-PEDF전염후,IPE세포생장정상,용형광현미경、RT-PCR화Western blotting균검측도PEDF표체.재MOI위20시,세포감염양성솔체64.22％.결론 AAV-PEDF능유효지전염체외배양적IPE세포병유효표체PEDF.
