江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
4期
49-51
,共3页
王兴龙%金则新%李钧敏%徐兴利
王興龍%金則新%李鈞敏%徐興利
왕흥룡%금칙신%리균민%서흥리
接骨草%DNA%ISSR优化%遗传多样性
接骨草%DNA%ISSR優化%遺傳多樣性
접골초%DNA%ISSR우화%유전다양성
采用改进的SDS法提取接骨草叶片中的基因组DNA,通过单因素试验对接骨草ISSR反应体系中的模板DNA用量、引物用量、dNTP用量、牛血清白蛋白浓度、Taq DNA聚合酶用量、Mg2+浓度等进行筛选和优化,得到适合接骨草ISSR扩增的条件,10 μL PCR反应体系:1×Taq酶配套缓冲液,4ng模板DNA,1.5μmol/L引物,0.2mmol/L dNTP,2 mg/mL BSA,0.75 U Taq DNA聚合酶,2 mmol/L Mg2+.利用优化后的反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对24个接骨草个体的DNA进行扩增,共得到111个位点,其中103个为多态位点,多态位点百分率为92.79％,Nei指数为0.402 6,Shannon信息指数为0.5790,表明接骨草的遗传多样性水平很高.
採用改進的SDS法提取接骨草葉片中的基因組DNA,通過單因素試驗對接骨草ISSR反應體繫中的模闆DNA用量、引物用量、dNTP用量、牛血清白蛋白濃度、Taq DNA聚閤酶用量、Mg2+濃度等進行篩選和優化,得到適閤接骨草ISSR擴增的條件,10 μL PCR反應體繫:1×Taq酶配套緩遲液,4ng模闆DNA,1.5μmol/L引物,0.2mmol/L dNTP,2 mg/mL BSA,0.75 U Taq DNA聚閤酶,2 mmol/L Mg2+.利用優化後的反應體繫從100箇ISSR引物中篩選齣12箇重複性好、穩定性高的引物對24箇接骨草箇體的DNA進行擴增,共得到111箇位點,其中103箇為多態位點,多態位點百分率為92.79％,Nei指數為0.402 6,Shannon信息指數為0.5790,錶明接骨草的遺傳多樣性水平很高.
채용개진적SDS법제취접골초협편중적기인조DNA,통과단인소시험대접골초ISSR반응체계중적모판DNA용량、인물용량、dNTP용량、우혈청백단백농도、Taq DNA취합매용량、Mg2+농도등진행사선화우화,득도괄합접골초ISSR확증적조건,10 μL PCR반응체계:1×Taq매배투완충액,4ng모판DNA,1.5μmol/L인물,0.2mmol/L dNTP,2 mg/mL BSA,0.75 U Taq DNA취합매,2 mmol/L Mg2+.이용우화후적반응체계종100개ISSR인물중사선출12개중복성호、은정성고적인물대24개접골초개체적DNA진행확증,공득도111개위점,기중103개위다태위점,다태위점백분솔위92.79％,Nei지수위0.402 6,Shannon신식지수위0.5790,표명접골초적유전다양성수평흔고.
