中华消化杂志
中華消化雜誌
중화소화잡지
Chinese Journal of Digestion
2007年
5期
318-321
,共4页
尹川%林勇%沈健伟%张新%王要军%岳海燕%谢渭芬%曾欣
尹川%林勇%瀋健偉%張新%王要軍%嶽海燕%謝渭芬%曾訢
윤천%림용%침건위%장신%왕요군%악해연%사위분%증흔
肝细胞核因子%肝肿瘤%基因
肝細胞覈因子%肝腫瘤%基因
간세포핵인자%간종류%기인
目的 利用AdEasy系统构建共同表达人肝细胞核因子4α(HNF4α)和绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型重组腺病毒--AdHNF4α,体外感染人肝肿瘤细胞株,观察HNF4α表达上调对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响.方法 通过逆转录(RT)-PCR方法获取目的基因HNF4αcDNA片段,利用腺病毒载体AdEasy系统构建腺病毒质粒pAdHNF4α,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHNF4α;将AdHNF4a体外感染人肝肿瘤细胞株HepG2和Hep3B,通过RT-PCR、Western印迹法检测HNF4α在上述细胞中的表达;同时观察外源导入HNF4a对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响.结果 连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒pAdHNF4α;经293细胞包装,4 d后观察到GFP明显表达,反复扩增最终获得约1×1010 efu/ml滴度的重组腺病毒AdHNF4α;AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞72h后,有约90%以上的细胞表达GFP,HNF4α mRNA表达明显上调,蛋白表达分别增加3.4倍(HepG2)和5.2倍(Hep3B);同时肝细胞相关功能基因包括载脂蛋白、细胞色素P450家族、谷氨酰胺合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶及葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达均明显上调,且肿瘤细胞凋亡率也明显增加.结论 利用重组腺病毒载体可将外源HNF4α基因导入肝肿瘤细胞并维持高效表达,同时正常肝细胞重要功能基因表达亦增强,肿瘤细胞生物学特性明显改善,这将为基因修饰移植肝细胞研究提供新思路.
目的 利用AdEasy繫統構建共同錶達人肝細胞覈因子4α(HNF4α)和綠色熒光蛋白(GFP)的複製缺陷型重組腺病毒--AdHNF4α,體外感染人肝腫瘤細胞株,觀察HNF4α錶達上調對肝腫瘤細胞的肝細胞功能基因錶達的影響.方法 通過逆轉錄(RT)-PCR方法穫取目的基因HNF4αcDNA片段,利用腺病毒載體AdEasy繫統構建腺病毒質粒pAdHNF4α,經293細胞包裝後得到複製缺陷型重組腺病毒AdHNF4α;將AdHNF4a體外感染人肝腫瘤細胞株HepG2和Hep3B,通過RT-PCR、Western印跡法檢測HNF4α在上述細胞中的錶達;同時觀察外源導入HNF4a對肝腫瘤細胞的肝細胞功能基因錶達的影響.結果 連接、重組後通過酶切和測序法篩選齣病毒質粒pAdHNF4α;經293細胞包裝,4 d後觀察到GFP明顯錶達,反複擴增最終穫得約1×1010 efu/ml滴度的重組腺病毒AdHNF4α;AdHNF4α體外感染人肝腫瘤細胞72h後,有約90%以上的細胞錶達GFP,HNF4α mRNA錶達明顯上調,蛋白錶達分彆增加3.4倍(HepG2)和5.2倍(Hep3B);同時肝細胞相關功能基因包括載脂蛋白、細胞色素P450傢族、穀氨酰胺閤成酶、燐痠烯醇丙酮痠羧激酶及葡萄糖-6-燐痠酶mRNA錶達均明顯上調,且腫瘤細胞凋亡率也明顯增加.結論 利用重組腺病毒載體可將外源HNF4α基因導入肝腫瘤細胞併維持高效錶達,同時正常肝細胞重要功能基因錶達亦增彊,腫瘤細胞生物學特性明顯改善,這將為基因脩飾移植肝細胞研究提供新思路.
목적 이용AdEasy계통구건공동표체인간세포핵인자4α(HNF4α)화록색형광단백(GFP)적복제결함형중조선병독--AdHNF4α,체외감염인간종류세포주,관찰HNF4α표체상조대간종류세포적간세포공능기인표체적영향.방법 통과역전록(RT)-PCR방법획취목적기인HNF4αcDNA편단,이용선병독재체AdEasy계통구건선병독질립pAdHNF4α,경293세포포장후득도복제결함형중조선병독AdHNF4α;장AdHNF4a체외감염인간종류세포주HepG2화Hep3B,통과RT-PCR、Western인적법검측HNF4α재상술세포중적표체;동시관찰외원도입HNF4a대간종류세포적간세포공능기인표체적영향.결과 련접、중조후통과매절화측서법사선출병독질립pAdHNF4α;경293세포포장,4 d후관찰도GFP명현표체,반복확증최종획득약1×1010 efu/ml적도적중조선병독AdHNF4α;AdHNF4α체외감염인간종류세포72h후,유약90%이상적세포표체GFP,HNF4α mRNA표체명현상조,단백표체분별증가3.4배(HepG2)화5.2배(Hep3B);동시간세포상관공능기인포괄재지단백、세포색소P450가족、곡안선알합성매、린산희순병동산최격매급포도당-6-린산매mRNA표체균명현상조,차종류세포조망솔야명현증가.결론 이용중조선병독재체가장외원HNF4α기인도입간종류세포병유지고효표체,동시정상간세포중요공능기인표체역증강,종류세포생물학특성명현개선,저장위기인수식이식간세포연구제공신사로.
