第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
11期
1134-1136
,共3页
傅锐斌%吴平生%戴铁英%赖文岩%邱建
傅銳斌%吳平生%戴鐵英%賴文巖%邱建
부예빈%오평생%대철영%뢰문암%구건
低氧诱导因子%逆转录-聚合酶链反应%克隆,分子%真核表达载体%质粒%转染
低氧誘導因子%逆轉錄-聚閤酶鏈反應%剋隆,分子%真覈錶達載體%質粒%轉染
저양유도인자%역전록-취합매련반응%극륭,분자%진핵표체재체%질립%전염
目的克隆和构建带人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α.方法以大肠癌细胞株HT29的总RNA为模板,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),获得HIF-1α的cDNA,克隆入T载体,测序证实后克隆入真核表达载体pcDNA3.1+,酶切鉴定重组子.将构建好的pcDNA3.1+-HIF-1α用脂质体法转入HEK293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒的表达.结果扩增出HIF-1α cDNA全长,测序结果与Genbank记载完全一致,成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1+;建立了稳定的细胞株HEK293/PcDNA3.1+-HIF-1α.结论成功克隆和构建带人HIF-1α基因真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α,并证明其能在真核细胞内表达.
目的剋隆和構建帶人低氧誘導因子-1α(HIF-1α)基因真覈錶達載體pcDNA3.1+-HIF-1α.方法以大腸癌細胞株HT29的總RNA為模闆,進行逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR),穫得HIF-1α的cDNA,剋隆入T載體,測序證實後剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1+,酶切鑒定重組子.將構建好的pcDNA3.1+-HIF-1α用脂質體法轉入HEK293細胞,RT-PCR鑒定重組質粒的錶達.結果擴增齣HIF-1α cDNA全長,測序結果與Genbank記載完全一緻,成功剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1+;建立瞭穩定的細胞株HEK293/PcDNA3.1+-HIF-1α.結論成功剋隆和構建帶人HIF-1α基因真覈錶達載體pcDNA3.1+-HIF-1α,併證明其能在真覈細胞內錶達.
목적극륭화구건대인저양유도인자-1α(HIF-1α)기인진핵표체재체pcDNA3.1+-HIF-1α.방법이대장암세포주HT29적총RNA위모판,진행역전록-취합매련반응(RT-PCR),획득HIF-1α적cDNA,극륭입T재체,측서증실후극륭입진핵표체재체pcDNA3.1+,매절감정중조자.장구건호적pcDNA3.1+-HIF-1α용지질체법전입HEK293세포,RT-PCR감정중조질립적표체.결과확증출HIF-1α cDNA전장,측서결과여Genbank기재완전일치,성공극륭입진핵표체재체pcDNA3.1+;건립료은정적세포주HEK293/PcDNA3.1+-HIF-1α.결론성공극륭화구건대인HIF-1α기인진핵표체재체pcDNA3.1+-HIF-1α,병증명기능재진핵세포내표체.
