CAJ | 학술논문

在Pima 90幼苗接种黄萎病病原菌后2、4、8、12、24、48、72和96 h分批取幼根以抽提棉花总RNA.以未接种病原的棉花cDNA为驱动方,利用SSH法对接种病原后的棉花cDNA进行差减杂交.对杂交后的cDNA进行T/A克隆并转化到大肠杆菌中完成文库构建,共获得了534个克隆.以M13引物对扩增插入片段进行PCR扩增,电泳结果显示插入片段大小从0.2～1.2 kb不等,平均大小为0.5 kb.将克隆中的插入片段点种于尼龙膜上,分别以病原诱导前后的总cDNA为探针进行反向Northern杂交.对78个在海岛棉的抗病反应中呈上升表达的克隆进行了测序并对测序结果去载体后在NCBI上利用Blastn和Blastx进行序列相似性分析.结果表明,大部分阳性克隆与拟南芥等多个物种不同逆境条件下诱导的相关基因或表达序列相同或同源,如棉花病程相关蛋白家族10,拟南芥抗病反应家族蛋白等.SSH文库的构建和分析将有助于了解棉花抗黄萎病反应的分子机制.
재Pima 90유묘접충황위병병원균후2、4、8、12、24、48、72화96 h분비취유근이추제면화총RNA.이미접충병원적면화cDNA위구동방,이용SSH법대접충병원후적면화cDNA진행차감잡교.대잡교후적cDNA진행T/A극륭병전화도대장간균중완성문고구건,공획득료534개극륭.이M13인물대확증삽입편단진행PCR확증,전영결과현시삽입편단대소종0.2～1.2 kb불등,평균대소위0.5 kb.장극륭중적삽입편단점충우니룡막상,분별이병원유도전후적총cDNA위탐침진행반향Northern잡교.대78개재해도면적항병반응중정상승표체적극륭진행료측서병대측서결과거재체후재NCBI상이용Blastn화Blastx진행서렬상사성분석.결과표명,대부분양성극륭여의남개등다개물충불동역경조건하유도적상관기인혹표체서렬상동혹동원,여면화병정상관단백가족10,의남개항병반응가족단백등.SSH문고적구건화분석장유조우료해면화항황위병반응적분자궤제.