CAJ | 학술논문

目的利用基因芯片技术检测包括披膜病毒科甲病毒属、黄病毒科黄病毒属、布尼亚病毒科汉坦病毒属及SARS病毒等10种烈性RNA病毒.方法设计了甲病毒属的属保守区通用引物和黄病毒属的通用引物,与布尼亚病毒及SARS病毒的引物一起用于扩增靶核酸.另外,在通用引物所能扩增的区域内设计每种病毒的特异引物,利用该引物通过PCR反应制备cDNA克隆探针,在判定其特异性后,制备氨基化探针.对探针浓度、杂交温度、杂交时间、不同杂交液及杂交后芯片的洗涤方法进行了优化.结果核酸探针浓度为0.3μg/μl时,可获得杂交信号;在杂交液终浓度含20%甲酰胺、杂交60℃、1.5h的条件下,可分别获得以上10种病毒的特异杂交信号.利用多重PCR扩增靶序列时,可获得2种或4种混合病原体的特异性杂交信号.结论利用基因芯片技术检测病毒性病原体是可行的,关键在于设计合适的引物及探针序列.
목적이용기인심편기술검측포괄피막병독과갑병독속、황병독과황병독속、포니아병독과한탄병독속급SARS병독등10충렬성RNA병독.방법설계료갑병독속적속보수구통용인물화황병독속적통용인물,여포니아병독급SARS병독적인물일기용우확증파핵산.령외,재통용인물소능확증적구역내설계매충병독적특이인물,이용해인물통과PCR반응제비cDNA극륭탐침,재판정기특이성후,제비안기화탐침.대탐침농도、잡교온도、잡교시간、불동잡교액급잡교후심편적세조방법진행료우화.결과핵산탐침농도위0.3μg/μl시,가획득잡교신호;재잡교액종농도함20%갑선알、잡교60℃、1.5h적조건하,가분별획득이상10충병독적특이잡교신호.이용다중PCR확증파서렬시,가획득2충혹4충혼합병원체적특이성잡교신호.결론이용기인심편기술검측병독성병원체시가행적,관건재우설계합괄적인물급탐침서렬.