世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2006年
20期
1970-1976
,共7页
李红%曹厚法%万军%李园%朱美玲%韩为东
李紅%曹厚法%萬軍%李園%硃美玲%韓為東
리홍%조후법%만군%리완%주미령%한위동
野生型K-ras2%结肠癌%基因芯片
野生型K-ras2%結腸癌%基因芯片
야생형K-ras2%결장암%기인심편
目的:应用基因芯片技术,检测野生型K-ras2基因在结肠癌Caco2细胞中表达诱发的基因谱改变,进一步阐明野生型K-ras2基因可能的分子生物学功能.方法:抽取正常人的静脉血,提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板,采用PCR方法克隆K-ras2野生型全编码cDNA序列.以常规的分子生物学技术将获得的K-ras2 cDNA克隆到T Easy载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pCI-neo-K-ras2,以脂质体转染结肠癌细胞系Caco2,提取mRNA逆转录为cDNA与转染空白表达载体pCI-neo的Caco2细胞进行cDNA芯片分析.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定证实准确无误,提取高质量的RNA逆转录为cDNA进行DNA芯片技术分析.在135个差异表达基因中发现有24个基因表达水平显著上调,121个基因表达水平显著下调.差异表达基因与细胞增殖、分化、凋亡和信号传导等有关.结论:应用基因表达谱芯片技术成功筛选了野生型K-ras2转染结肠癌细胞后差异表达基因,反映出野生型K-ras2对细胞增殖、代谢、转录调控等过程的负性调控状态,为进一步阐明野生型K-ras2可能的生物学功能提供了新的线索.
目的:應用基因芯片技術,檢測野生型K-ras2基因在結腸癌Caco2細胞中錶達誘髮的基因譜改變,進一步闡明野生型K-ras2基因可能的分子生物學功能.方法:抽取正常人的靜脈血,提取RNA,反轉錄成cDNA,以此為模闆,採用PCR方法剋隆K-ras2野生型全編碼cDNA序列.以常規的分子生物學技術將穫得的K-ras2 cDNA剋隆到T Easy載體中進行覈苷痠序列的測定,構建真覈錶達載體pCI-neo-K-ras2,以脂質體轉染結腸癌細胞繫Caco2,提取mRNA逆轉錄為cDNA與轉染空白錶達載體pCI-neo的Caco2細胞進行cDNA芯片分析.結果:構建的錶達載體經過限製性內切酶分析和DNA序列測定證實準確無誤,提取高質量的RNA逆轉錄為cDNA進行DNA芯片技術分析.在135箇差異錶達基因中髮現有24箇基因錶達水平顯著上調,121箇基因錶達水平顯著下調.差異錶達基因與細胞增殖、分化、凋亡和信號傳導等有關.結論:應用基因錶達譜芯片技術成功篩選瞭野生型K-ras2轉染結腸癌細胞後差異錶達基因,反映齣野生型K-ras2對細胞增殖、代謝、轉錄調控等過程的負性調控狀態,為進一步闡明野生型K-ras2可能的生物學功能提供瞭新的線索.
목적:응용기인심편기술,검측야생형K-ras2기인재결장암Caco2세포중표체유발적기인보개변,진일보천명야생형K-ras2기인가능적분자생물학공능.방법:추취정상인적정맥혈,제취RNA,반전록성cDNA,이차위모판,채용PCR방법극륭K-ras2야생형전편마cDNA서렬.이상규적분자생물학기술장획득적K-ras2 cDNA극륭도T Easy재체중진행핵감산서렬적측정,구건진핵표체재체pCI-neo-K-ras2,이지질체전염결장암세포계Caco2,제취mRNA역전록위cDNA여전염공백표체재체pCI-neo적Caco2세포진행cDNA심편분석.결과:구건적표체재체경과한제성내절매분석화DNA서렬측정증실준학무오,제취고질량적RNA역전록위cDNA진행DNA심편기술분석.재135개차이표체기인중발현유24개기인표체수평현저상조,121개기인표체수평현저하조.차이표체기인여세포증식、분화、조망화신호전도등유관.결론:응용기인표체보심편기술성공사선료야생형K-ras2전염결장암세포후차이표체기인,반영출야생형K-ras2대세포증식、대사、전록조공등과정적부성조공상태,위진일보천명야생형K-ras2가능적생물학공능제공료신적선색.
