苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2008年
2期
222-225,封2
,共5页
王守立%姚辉华%董亮%邓敏%顾永平%孙茂民
王守立%姚輝華%董亮%鄧敏%顧永平%孫茂民
왕수립%요휘화%동량%산민%고영평%손무민
RNA干扰%TGF-β1%肿瘤微环境%方法
RNA榦擾%TGF-β1%腫瘤微環境%方法
RNA간우%TGF-β1%종류미배경%방법
目的 探讨脂质体介导的转化生长因子β1(TCF-β1)短发夹RNA(shRNA)在人肿瘤细胞株的转入效率,为研究TGF-β1信号转导在肿瘤微环境中的作用机制提供方法依据.方法 化学合成TGF-β1小干扰RNA(siRNA),与脂质体转染介质混合制备转染复合物(Lip-shRNA),处理细胞24h后用流式细胞术(FCM)及人工计数法测定RD细胞的转入率;免疫荧光技术检测细胞TGF-β1蛋白表达水平.结果 荧光显微镜观察硫代磷酸化修饰的寡核苷酸转入4h后,shRNA主要定位在细胞浆,8h后细胞核中有较多的shRNA;FCM测得转入细胞转入率与Lip-shRNA复合物呈剂量依赖关系,人工测得shRNA的转入率与转入复合物在低剂量呈剂量依赖关系,但在高剂量时增高不明显.转人6d后各组细胞TGF-β1蛋白表达量较转入3d时明显减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 脂质体介导的TGF-β1shRNA在常见肿瘤细胞株中的转入效率与寡核苷酸的稳定性、Lip-shRNA复合物剂量、转入时间密切相关,该转染技术可以作为RNA干扰手段研究TGF-β1信号转导的病理学机制.
目的 探討脂質體介導的轉化生長因子β1(TCF-β1)短髮夾RNA(shRNA)在人腫瘤細胞株的轉入效率,為研究TGF-β1信號轉導在腫瘤微環境中的作用機製提供方法依據.方法 化學閤成TGF-β1小榦擾RNA(siRNA),與脂質體轉染介質混閤製備轉染複閤物(Lip-shRNA),處理細胞24h後用流式細胞術(FCM)及人工計數法測定RD細胞的轉入率;免疫熒光技術檢測細胞TGF-β1蛋白錶達水平.結果 熒光顯微鏡觀察硫代燐痠化脩飾的寡覈苷痠轉入4h後,shRNA主要定位在細胞漿,8h後細胞覈中有較多的shRNA;FCM測得轉入細胞轉入率與Lip-shRNA複閤物呈劑量依賴關繫,人工測得shRNA的轉入率與轉入複閤物在低劑量呈劑量依賴關繫,但在高劑量時增高不明顯.轉人6d後各組細胞TGF-β1蛋白錶達量較轉入3d時明顯減少,與對照組比較,差異有統計學意義(P<0.05).結論 脂質體介導的TGF-β1shRNA在常見腫瘤細胞株中的轉入效率與寡覈苷痠的穩定性、Lip-shRNA複閤物劑量、轉入時間密切相關,該轉染技術可以作為RNA榦擾手段研究TGF-β1信號轉導的病理學機製.
목적 탐토지질체개도적전화생장인자β1(TCF-β1)단발협RNA(shRNA)재인종류세포주적전입효솔,위연구TGF-β1신호전도재종류미배경중적작용궤제제공방법의거.방법 화학합성TGF-β1소간우RNA(siRNA),여지질체전염개질혼합제비전염복합물(Lip-shRNA),처리세포24h후용류식세포술(FCM)급인공계수법측정RD세포적전입솔;면역형광기술검측세포TGF-β1단백표체수평.결과 형광현미경관찰류대린산화수식적과핵감산전입4h후,shRNA주요정위재세포장,8h후세포핵중유교다적shRNA;FCM측득전입세포전입솔여Lip-shRNA복합물정제량의뢰관계,인공측득shRNA적전입솔여전입복합물재저제량정제량의뢰관계,단재고제량시증고불명현.전인6d후각조세포TGF-β1단백표체량교전입3d시명현감소,여대조조비교,차이유통계학의의(P<0.05).결론 지질체개도적TGF-β1shRNA재상견종류세포주중적전입효솔여과핵감산적은정성、Lip-shRNA복합물제량、전입시간밀절상관,해전염기술가이작위RNA간우수단연구TGF-β1신호전도적병이학궤제.
