南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
9期
1630-1633
,共4页
卢雅丕%周飞%王琳%张波%董菁%任建林
盧雅丕%週飛%王琳%張波%董菁%任建林
로아비%주비%왕림%장파%동정%임건림
人肠三叶因子%基因重组%真核表达载体
人腸三葉因子%基因重組%真覈錶達載體
인장삼협인자%기인중조%진핵표체재체
目的 构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)的真核载体并在真核细胞中表达.方法 从人结肠粘膜提取总RNA,逆转录多聚酶反应制备总cDNA,PCR扩增hTFF3基因,TA克隆至pGEMT载体中,测序鉴定后将hTFF3基因重组到真核表达载体pCMV5-myc中,转染真核细胞293-T,裂解细胞后分别采用鼠抗人c-myc抗体和鼠抗人11下3抗体行Western-blot了解hTFF3表达情况.结果 从人结肠粘膜成功克隆了hTFF3基因并经测序验证,构建了pCMV5-myc-hTFF3真核表达载体,转染细胞后行western-blot提示hTFF3可在293-T细胞中表达.结论 成功构建pCMV5-myc-hTFF3重组真核载体并在293-T细胞中表达hTFF3蛋白,为进一步研究hTFF3的功能、作用机制及相互作用蛋白奠定了基础.
目的 構建人腸三葉因子(hITF/hTFF3)的真覈載體併在真覈細胞中錶達.方法 從人結腸粘膜提取總RNA,逆轉錄多聚酶反應製備總cDNA,PCR擴增hTFF3基因,TA剋隆至pGEMT載體中,測序鑒定後將hTFF3基因重組到真覈錶達載體pCMV5-myc中,轉染真覈細胞293-T,裂解細胞後分彆採用鼠抗人c-myc抗體和鼠抗人11下3抗體行Western-blot瞭解hTFF3錶達情況.結果 從人結腸粘膜成功剋隆瞭hTFF3基因併經測序驗證,構建瞭pCMV5-myc-hTFF3真覈錶達載體,轉染細胞後行western-blot提示hTFF3可在293-T細胞中錶達.結論 成功構建pCMV5-myc-hTFF3重組真覈載體併在293-T細胞中錶達hTFF3蛋白,為進一步研究hTFF3的功能、作用機製及相互作用蛋白奠定瞭基礎.
목적 구건인장삼협인자(hITF/hTFF3)적진핵재체병재진핵세포중표체.방법 종인결장점막제취총RNA,역전록다취매반응제비총cDNA,PCR확증hTFF3기인,TA극륭지pGEMT재체중,측서감정후장hTFF3기인중조도진핵표체재체pCMV5-myc중,전염진핵세포293-T,렬해세포후분별채용서항인c-myc항체화서항인11하3항체행Western-blot료해hTFF3표체정황.결과 종인결장점막성공극륭료hTFF3기인병경측서험증,구건료pCMV5-myc-hTFF3진핵표체재체,전염세포후행western-blot제시hTFF3가재293-T세포중표체.결론 성공구건pCMV5-myc-hTFF3중조진핵재체병재293-T세포중표체hTFF3단백,위진일보연구hTFF3적공능、작용궤제급상호작용단백전정료기출.
