CAJ | 학술논문

背景:肿瘤干细胞理论的产生,对肿瘤的发生、发展及其发病机制有了更新的认识,为肿瘤研究提供了新的方向,通过无血清培养技术已从许多肿瘤中分离并鉴定出特定的肿瘤干细胞.目前,无血清培养已成为培养肿瘤干细胞的经典培养方法.目的:运用无血清培养的方法从肾癌细胞中获取肾癌干细胞,并进行鉴定.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-02/2009-02在江苏大学完成.材料:肾癌细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供.方法:取处于对数生长期的肾痛细胞OS-RC-2,悬浮于预先配好的DMEM/F12无血清培养基中(含表皮生长因子20 μg/L,碱性成纤维细胞生长因子20 g/L),观察生长情况,培养7 d后运用流式细胞仪测定CD133及CD34的表达.以不含细胞因子的高糖DMEM/F12培养液培养细胞作为阴性对照.另外收集无血清培养7 d的肾癌细胞球,重悬于含体积分数为10%胎牛血清的高糖DMEM,F12培养基中,进行干细胞分化实验观察.主要观察指标:①倒置显微镜下观察肾癌干细胞生长情况.②流式细胞仪检测肾癌干细胞及肾癌细胞中CD133及CD34的表达.③收集无血清培养7 d后的肾癌干细胞重新常规培养并观察其分化情况.结果:①肾癌细胞接种于含细胞因子的无血清培养基2 d后可见有细胞球生成,7 d后细胞球明显增多,体积增大.对照组肾癌细胞则贴壁生长,未见细胞球生成.②流式细胞仪检测显示,肾癌细胞球中CD133+CD34-表达率(8.33±1.26)%,对照组肾癌细胞表达率(1.24±0.36)%(t=19.71,P＜0.05).③肾痛细胞球重新悬浮于含体积分数为10%胎牛血清的培养液2 d 后可见细胞球分散为单个细胞,恢复原来贴壁生长特点,CD133及CD34表达与阴性对照相同.结论:利用含细胞因子表皮牛长因子和碱性成纤维细胞生长因子无血清培养的方法可以从肾癌细胞中获取肾癌干细胞.
배경:종류간세포이론적산생,대종류적발생、발전급기발병궤제유료경신적인식,위종류연구제공료신적방향,통과무혈청배양기술이종허다종류중분리병감정출특정적종류간세포.목전,무혈청배양이성위배양종류간세포적경전배양방법.목적:운용무혈청배양적방법종신암세포중획취신암간세포,병진행감정.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2008-02/2009-02재강소대학완성.재료:신암세포주OS-RC-2유상해중과원세포고제공.방법:취처우대수생장기적신통세포OS-RC-2,현부우예선배호적DMEM/F12무혈청배양기중(함표피생장인자20 μg/L,감성성섬유세포생장인자20 g/L),관찰생장정황,배양7 d후운용류식세포의측정CD133급CD34적표체.이불함세포인자적고당DMEM/F12배양액배양세포작위음성대조.령외수집무혈청배양7 d적신암세포구,중현우함체적분수위10%태우혈청적고당DMEM,F12배양기중,진행간세포분화실험관찰.주요관찰지표:①도치현미경하관찰신암간세포생장정황.②류식세포의검측신암간세포급신암세포중CD133급CD34적표체.③수집무혈청배양7 d후적신암간세포중신상규배양병관찰기분화정황.결과:①신암세포접충우함세포인자적무혈청배양기2 d후가견유세포구생성,7 d후세포구명현증다,체적증대.대조조신암세포칙첩벽생장,미견세포구생성.②류식세포의검측현시,신암세포구중CD133+CD34-표체솔(8.33±1.26)%,대조조신암세포표체솔(1.24±0.36)%(t=19.71,P＜0.05).③신통세포구중신현부우함체적분수위10%태우혈청적배양액2 d 후가견세포구분산위단개세포,회복원래첩벽생장특점,CD133급CD34표체여음성대조상동.결론:이용함세포인자표피우장인자화감성성섬유세포생장인자무혈청배양적방법가이종신암세포중획취신암간세포.