邵阳学院学报（自然科学版）
邵暘學院學報（自然科學版）
소양학원학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHAOYANG UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2010年
2期
58-63
,共6页
骨桥蛋白%原核表达%单克隆抗体
骨橋蛋白%原覈錶達%單剋隆抗體
골교단백%원핵표체%단극륭항체
利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因,构建OPN原核表达质粒pET-32a(+)-hOPN.转化BL21菌株,经IPTG诱导表达重组人骨桥蛋白(rhOPN).以纯化的rhOPN为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合.通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.结果共获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和2B5,亚型测定皆为IgG1.通过细胞侵袭抑制试验检测,2株抗人OPN mAb皆能很好地抑制细胞迁移.本研究成功获得了抗人骨桥蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究OPN蛋白在自身免疫病和肿瘤中的功能提供了重要的工具.
利用RT-PCR技術剋隆人骨橋蛋白(hOPN)基因,構建OPN原覈錶達質粒pET-32a(+)-hOPN.轉化BL21菌株,經IPTG誘導錶達重組人骨橋蛋白(rhOPN).以純化的rhOPN為免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞NS1融閤.通過有限稀釋法進行剋隆和間接ELISA篩選,穫得抗人OPN蛋白單剋隆抗體雜交瘤細胞株,以ELISA、Western blot對抗體特異性進行鑒定.通過競爭抑製試驗對單剋隆抗體識彆抗原位點進行分析.結果共穫得2株抗人OPN單剋隆抗體,分彆命名為8F1和2B5,亞型測定皆為IgG1.通過細胞侵襲抑製試驗檢測,2株抗人OPN mAb皆能很好地抑製細胞遷移.本研究成功穫得瞭抗人骨橋蛋白的特異性單剋隆抗體,為進一步研究OPN蛋白在自身免疫病和腫瘤中的功能提供瞭重要的工具.
이용RT-PCR기술극륭인골교단백(hOPN)기인,구건OPN원핵표체질립pET-32a(+)-hOPN.전화BL21균주,경IPTG유도표체중조인골교단백(rhOPN).이순화적rhOPN위면역원,면역BABL/c소서,취기비세포여소서골수류세포NS1융합.통과유한희석법진행극륭화간접ELISA사선,획득항인OPN단백단극륭항체잡교류세포주,이ELISA、Western blot대항체특이성진행감정.통과경쟁억제시험대단극륭항체식별항원위점진행분석.결과공획득2주항인OPN단극륭항체,분별명명위8F1화2B5,아형측정개위IgG1.통과세포침습억제시험검측,2주항인OPN mAb개능흔호지억제세포천이.본연구성공획득료항인골교단백적특이성단극륭항체,위진일보연구OPN단백재자신면역병화종류중적공능제공료중요적공구.
