生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
2期
102-106
,共5页
幽门螺杆菌%Catalase%融合表达%GST标签切除%纯化
幽門螺桿菌%Catalase%融閤錶達%GST標籤切除%純化
유문라간균%Catalase%융합표체%GST표첨절제%순화
旨在利用GST融合基因表达系统表达幽门螺杆菌Catalase融合蛋白,并利用凝血酶切除GST标签.将重组质粒Catalase/pGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21( DE3)感受态中,用IPTG进行诱导表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌后,Catalase/GST融合蛋白以部分可溶性的形式表达在上清中.采用谷胱甘肽琼脂糖树脂Glutathione Sepharose 4B对其进行纯化,得到Catalase/GST融合蛋白,再用凝血酶进行GST标签的切除,所得产物进行Western blotting鉴定.高效表达出Catalase/GST融合蛋白的相对分子质量约85 kD,凝血酶成功地切除了GST标签,Western blotting证实Catalase蛋白能被鼠抗Catalase单克隆抗体识别.
旨在利用GST融閤基因錶達繫統錶達幽門螺桿菌Catalase融閤蛋白,併利用凝血酶切除GST標籤.將重組質粒Catalase/pGEX-4T-1轉化大腸桿菌BL21( DE3)感受態中,用IPTG進行誘導錶達,菌體經反複凍融、溶菌酶裂解及超聲破菌後,Catalase/GST融閤蛋白以部分可溶性的形式錶達在上清中.採用穀胱甘肽瓊脂糖樹脂Glutathione Sepharose 4B對其進行純化,得到Catalase/GST融閤蛋白,再用凝血酶進行GST標籤的切除,所得產物進行Western blotting鑒定.高效錶達齣Catalase/GST融閤蛋白的相對分子質量約85 kD,凝血酶成功地切除瞭GST標籤,Western blotting證實Catalase蛋白能被鼠抗Catalase單剋隆抗體識彆.
지재이용GST융합기인표체계통표체유문라간균Catalase융합단백,병이용응혈매절제GST표첨.장중조질립Catalase/pGEX-4T-1전화대장간균BL21( DE3)감수태중,용IPTG진행유도표체,균체경반복동융、용균매렬해급초성파균후,Catalase/GST융합단백이부분가용성적형식표체재상청중.채용곡광감태경지당수지Glutathione Sepharose 4B대기진행순화,득도Catalase/GST융합단백,재용응혈매진행GST표첨적절제,소득산물진행Western blotting감정.고효표체출Catalase/GST융합단백적상대분자질량약85 kD,응혈매성공지절제료GST표첨,Western blotting증실Catalase단백능피서항Catalase단극륭항체식별.
