青岛大学医学院学报
青島大學醫學院學報
청도대학의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QINGDAO UNIVERSITATIS
2012年
4期
283-286
,共4页
杨晓琮%贺敏%王璇琳%李伟静%于群%葛银林
楊曉琮%賀敏%王璇琳%李偉靜%于群%葛銀林
양효종%하민%왕선림%리위정%우군%갈은림
树突细胞%转染%白细胞介素4%粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
樹突細胞%轉染%白細胞介素4%粒細胞巨噬細胞集落刺激因子
수돌세포%전염%백세포개소4%립세포거서세포집락자격인자
目的 获得分别能稳定表达人白细胞介素4(IL-4)和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的内皮细胞株,并用于树突状细胞(DC)的体外诱导培养.方法 构建重组的慢病毒表达载体,在293T细胞中进行慢病毒的包装,用获得的高滴度的慢病毒感染内皮细胞EA.hy926细胞株,建立能够高效、稳定表达IL-4和GMCSF的EA.hy926细胞株.结果 EA.hy926细胞株感染效率达90％以上,长期传代仍能保持较高阳性率.RTPCR在mRNA水平上检测目的基因有表达；ELISA和Western方法证实感染后细胞IL-4、GM-CSF在蛋白水平的表达分别是未感染细胞的80倍和143倍.感染后细胞的生长状态良好,能够长期在体外进行传代培养,可以用于DC诱导实验.结论 构建的细胞系可以稳定表达细胞因子IL-4和GM-CSF.
目的 穫得分彆能穩定錶達人白細胞介素4(IL-4)和人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)的內皮細胞株,併用于樹突狀細胞(DC)的體外誘導培養.方法 構建重組的慢病毒錶達載體,在293T細胞中進行慢病毒的包裝,用穫得的高滴度的慢病毒感染內皮細胞EA.hy926細胞株,建立能夠高效、穩定錶達IL-4和GMCSF的EA.hy926細胞株.結果 EA.hy926細胞株感染效率達90％以上,長期傳代仍能保持較高暘性率.RTPCR在mRNA水平上檢測目的基因有錶達；ELISA和Western方法證實感染後細胞IL-4、GM-CSF在蛋白水平的錶達分彆是未感染細胞的80倍和143倍.感染後細胞的生長狀態良好,能夠長期在體外進行傳代培養,可以用于DC誘導實驗.結論 構建的細胞繫可以穩定錶達細胞因子IL-4和GM-CSF.
목적 획득분별능은정표체인백세포개소4(IL-4)화인립세포거서세포집락자격인자(GM-CSF)적내피세포주,병용우수돌상세포(DC)적체외유도배양.방법 구건중조적만병독표체재체,재293T세포중진행만병독적포장,용획득적고적도적만병독감염내피세포EA.hy926세포주,건립능구고효、은정표체IL-4화GMCSF적EA.hy926세포주.결과 EA.hy926세포주감염효솔체90％이상,장기전대잉능보지교고양성솔.RTPCR재mRNA수평상검측목적기인유표체；ELISA화Western방법증실감염후세포IL-4、GM-CSF재단백수평적표체분별시미감염세포적80배화143배.감염후세포적생장상태량호,능구장기재체외진행전대배양,가이용우DC유도실험.결론 구건적세포계가이은정표체세포인자IL-4화GM-CSF.
