中华预防医学杂志
中華預防醫學雜誌
중화예방의학잡지
CHINESE JOURNAL OF
2008年
2期
81-85
,共5页
毕爱笑%丁元生%刘忠华%胡忠义
畢愛笑%丁元生%劉忠華%鬍忠義
필애소%정원생%류충화%호충의
分枝杆菌,结核%基因表达%血清学试验
分枝桿菌,結覈%基因錶達%血清學試驗
분지간균,결핵%기인표체%혈청학시험
目的 构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白32(culture filtrate protein 32,CFP32)的重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化重组蛋白CFP32,探讨其对结核病的诊断价值.方法 通过聚合酶链反应技术从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中扩增出Rv0577基因,将其克隆到pMD18一T载体后,再亚克隆到表达载体pET21a,在大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经纯化及复性后,通过Western blot分析,并以酶联免疫吸附试验检测160例血清抗体,其中肺结核患者97例、非结核肺部疾病患者25例,正常对照38名.结果 构建了CFP32重组质粒,并在大肠杆菌中进行了高效表达,表达蛋白经SDSPAGE分析,在约相对分子质量30 000处有表达条带,镍柱纯化后的重组蛋白占总蛋白的90%以上.Western blot证实重组蛋白可以与结核患者血清特异结合.并以此蛋白进行160份血清结核抗体检测,结果敏感度为63.9%(62/97),特异度为96.8%(2/63).结论 成功构建pET21a-CFP32表达载体,并在大肠杆菌中高效表达CFP32蛋白,对其血清抗体检测证明重组的CFP32蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选者之一.
目的 構建結覈分枝桿菌培養濾液蛋白32(culture filtrate protein 32,CFP32)的重組質粒,在大腸桿菌中錶達併純化重組蛋白CFP32,探討其對結覈病的診斷價值.方法 通過聚閤酶鏈反應技術從結覈分枝桿菌H37Rv株基因組中擴增齣Rv0577基因,將其剋隆到pMD18一T載體後,再亞剋隆到錶達載體pET21a,在大腸桿菌BL21(DE3)進行錶達,經純化及複性後,通過Western blot分析,併以酶聯免疫吸附試驗檢測160例血清抗體,其中肺結覈患者97例、非結覈肺部疾病患者25例,正常對照38名.結果 構建瞭CFP32重組質粒,併在大腸桿菌中進行瞭高效錶達,錶達蛋白經SDSPAGE分析,在約相對分子質量30 000處有錶達條帶,鎳柱純化後的重組蛋白佔總蛋白的90%以上.Western blot證實重組蛋白可以與結覈患者血清特異結閤.併以此蛋白進行160份血清結覈抗體檢測,結果敏感度為63.9%(62/97),特異度為96.8%(2/63).結論 成功構建pET21a-CFP32錶達載體,併在大腸桿菌中高效錶達CFP32蛋白,對其血清抗體檢測證明重組的CFP32蛋白有希望成為結覈病血清學診斷的有效候選者之一.
목적 구건결핵분지간균배양려액단백32(culture filtrate protein 32,CFP32)적중조질립,재대장간균중표체병순화중조단백CFP32,탐토기대결핵병적진단개치.방법 통과취합매련반응기술종결핵분지간균H37Rv주기인조중확증출Rv0577기인,장기극륭도pMD18일T재체후,재아극륭도표체재체pET21a,재대장간균BL21(DE3)진행표체,경순화급복성후,통과Western blot분석,병이매련면역흡부시험검측160례혈청항체,기중폐결핵환자97례、비결핵폐부질병환자25례,정상대조38명.결과 구건료CFP32중조질립,병재대장간균중진행료고효표체,표체단백경SDSPAGE분석,재약상대분자질량30 000처유표체조대,얼주순화후적중조단백점총단백적90%이상.Western blot증실중조단백가이여결핵환자혈청특이결합.병이차단백진행160빈혈청결핵항체검측,결과민감도위63.9%(62/97),특이도위96.8%(2/63).결론 성공구건pET21a-CFP32표체재체,병재대장간균중고효표체CFP32단백,대기혈청항체검측증명중조적CFP32단백유희망성위결핵병혈청학진단적유효후선자지일.
